В однослойную культуру клеток вносят исследуемый материал. Покачивая, равномерно распределяют материал и помещают в термостат при температуре 37°С на 1,5 часа для адсорбции. На культуру клеток наносят питательный агар, через 1 час после затвердевания агара посев помещают в термостат при 36-37°С. Учет результатов после 2-4 дней инкубации по образованию бляшек – участков разрушенных вирусом клеток.
Для идентификации выделенного вируса смешивают равные объемы разведения вируса и соответствующих разведений иммунной сыворотки, смесь инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре. Смесь и контроль (вирус без сыворотки) вводят в однослойную культуру клеток, затем покрывают агаром. Учет проводят по сравнению числа бляшек в опыте и контроле. Реакция считается положительной при снижении числа бляшек в опыте, по сравнению с контролем – принцип нейтрализации.
ПРОТОКОЛ
Цель:
| Исследуемый материал | Выделение вируса | Идентификация вируса | ||||||
| Опыт | Контроль | Иммунные сыворотки к полиовирусам типа: | Разведения сыворотки | |||||
| 1:10 | 1:20 | 1:30 | 1:40 | К | ||||
| Рисунок | Рисунок | I | ||||||
| II |
Заключение: (Ответить на вопросы: 1. С какой целью исследовались фекалии больного? 2. Обнаружен ли вирус в культуре ткани? 3. Каким способом обнаруживается вирус? 4. Какая реакция и какой метод ее учета использованы при идентификации вируса? 5. Закончено ли исследование?).
Р а б о т а №2
Цель: Познакомиться с использованием реакции нейтрализации для оценки эффективности вакцинации от полиомиелита.
Задача.С сыворотками детей С. и Н., привитых от полиомиелита, 3 недели спустя поставлена реакция нейтрализации с комплексным антигеном вируса полиомиелита по цветной пробе. Учесть результаты реакции. Оформить протокол. Сделать заключение.