Желчь собирают при помощи дуоденального зонда в процедурном кабинете отдельно по порциям А, В и С в три стерильные пробирки, либо во время операции с помощью шприца в одну пробирку, соблюдая правила асептики. Полученные порции желчи доставляют в лабораторию не позднее 1-2 ч от момента взятия, следя за тем, чтобы пробирки находились в строго вертикальном положении. При поступлении желчи в бактериологическую лабораторию проверяют ее кислотность по индикаторной бумажке, рН < 7 свидетельствует о присутствии желудочного сока, и желчь не исследуют.
Посев исследуемого материала, производят в соответствии с приказом МЗ СССР № 535 от 22.04.85 г на следующие питательные среды: 5%-ный кровяной агар, среду Эндо, МПА, среду Китта-Тароцци (для выявления анаэробов) и другие необходимые питательные среды.
По 0,1 мл каждой порции желчи, берут пипеткой и высевают на чашки Петри стерильным шпателем Дригальского, равномерно распределяя по всей поверхности агаризованной питательной среды; по 0,5 мл желчи засевают на чашку со средой Эндо. Для обеспечения роста анаэробов производят посев в две пробирки со средой Китта-Тароцци, одну из которых прогревают на водяной бане 20 мин при 80°С для уничтожения аэробной флоры. Оставшуюся желчь (сливают все порции в одну пробирку) заливают средой обогащения (1 : 10) и вместе со сделанными посевами помещают в термостат при 37°С на 24 ч. В случае бактериального роста на кровяном агаре подсчитывают количество колоний каждого вида, пересчитывают на 1 мл исследуемого материала и после бактериоскопии окрашенных по Граму мазков проводят дальнейшую идентификацию культур и определяют чувствительность к антибиотикам. С целью выделения сальмонелл в последующие 3 дня делают высевы на висмут-сульфитный агар из среды обогащения.
Наиболее достоверным является исследование желчи, полученной во время операции. При дуоденальном зондировании возможна контаминация желчи микрофлорой ротовой полости и верхних отделов пищеварительного тракта. Так, стафилококки и стрептококки находят в дуоденальном содержимом значительно чаще, чем в желчном пузыре при оперативном вмешательстве. Поэтому следует с особой осторожностью подходить к определению этиологической роли указанных микроорганизмов при холециститах и холангитах. Выделение золотистого стафилококка в значительном количестве может свидетельствовать о наличии печеночного или диафрагмального абсцесса. Обнаружение в дуоденальном содержимом сапрофитных нейссерий и дрожжеподобных грибов свидетельствует о контаминации желчи микрофлорой ротовой полости.