В составе ростовых питательных сред должно содержаться большое количество питательных веществ, чтобы обеспечить активное размножение клеток для формирования монослоя.
Поддерживающие среды должны обеспечивать лишь переживание клеток в уже сформированном монослое при размножении в клетке вирусов.
Они могут быть:
1) природными (сыворотка крови крупного рогатого скота, жидкости из серозных полостей, продукты гидролиза молока, различные гидролизаты – гемогидролизат, гидролизат лактальбумина, экстракты тканей)
2) синтетическими (среда 199 для культивирования первично-трипсинизированных и перевиваемых культур, среда Игла – содержит минимальный набор аминокислот и витаминов и используется для культивирования различнах линий клеток, среда Игла МЕМ – культивирование особо требовательных линий клеток).
Независимо от назначения все питательные среды для культур клеток конструируются на основе сбалансированного солевого раствора. Чаще всего им является раствор Хенкса.
Техника получения первично-трипсинизированных культур клеток из куриного эмбриона:
1. Обрабатывают скорлупу спиртом, йодом и снова спиртом.
2. Срезают скорлупу с тупого конца на границе воздушного мешка, удаляют подскорлупную оболочку, извлекают тело эмбриона (голову отделяют – не используется).
3. Тело эмбриона измельчают до кусочков 1-2 мм, поместив в раствор Хэнкса.
4. Переносят пастеровской пипеткой кусочки ткани в пробирки.
5. В пробирку наливают 2 мл раствора Хэнкса, дают жидкости отстояться, отсасывают (повторяют 2-3 раза для отмывания крови).
6. К отмытым кусочкам ткани добавляют 1-2 мл раствора трипсина, пипетируют (насасывание и выдувание на стенку пробирки) в течение 5 мин. Отстаивают жидкость в центифужной пробирке, наливают 3 мл гидролизата лактальбумина. К оставшимся кусочкам добавляют 1 мл раствора трипсина – повторяют операции.
7. Центрифугирование – 10 мин при 100 Об/мин.
8. Надосадочную жидкость отсасывают, осадок ресуспендируют в 5 мл лактальбумина.
9. Фильтруют через марлю.
10. Подсчет клеток в камере Горяева (считая всю камеру).
11. Суспензию клеток разводят раствором лактальбумина с сывороткой до содержания 400000 клеток в 1 мл и разливают по 1 мл в пробирки, закрывают стерильными пробками.
12. Инкубирование в термостате при 37ºС, в практически горизонтальном положении (угол 5º).