n электронный микроскоп изобретён в 30 - х годах XX в. , даёт увеличение до 106 раз
n применим только к фиксированным клеткам ( фиксатор убивает клетку , но не вызывает грубых изменений структур ; под действием фиксатора вещества клетки переходят в нерастворимую форму
n в основе действия лежит просвечивание пучком электронов тончайших , обработанных электронопоглощающими и одновременно фиксирующими соединениями или напылённых парами металлов срезов и фиксация микропрепаратов в сильно увеличенном виде на специальный экран или фотопластинку
n применяется для исследования субмикроскопического строения клеток и органелл
3. Электронная растровая эмиссионная ( сканирующая ) микроскопия
n даёт возможность получать трёхмерную ( обьёмную ) картину изображения поверхности срезов и целого объекта
4. Микрохимические ( цитохимические ) методы
n применение специальных цветных реакций непосредственно в клетке
n служат для определения локализации и количественного содержания отдельных химических веществ
5. Биохимические методы
-дают возможность получения индивидуальных химических соединений и отдельных органелл
· метод дифференциального центрифугирования - различные клеточные органеллы и включения имеют различную плотность , поэтому при очень быстром вращении ( до 60 тыс. об \ мин ) в специальном приборе - ультрацентрифуге - органеллы тонко измельчённых клеток выпадают в осадок из раствора , располагаясь слоями в соответствии со своей плотностью ( более плотные компоненты осаждаются при более низких скоростях центрифугирования ) . Эти слои разделяют и изучают отдельно
· хроматографическое разделение смесей
· электрофорез
6. Биофизические методы
· метод меченых атомов - замена в молекуле одного из атомов соответствующим радиоактивным изотопом ( 3 Н , 32 Р , 14 С ) - радиоактивная метка ( не отличается по химическим свойствам , зато легко регистрируется счётчиком при перемещениях в результате химических превращений ) ; позволяет установить последовательность этапов , продолжительность во времени , зависимость от условий биохимических процессов , происходящих в живой клетке
· изотопный анализ
· регистрация биоэлектрических потенциалов с помощью электрофизиологической аппаратуры
· хемилюминесценция
· математическое моделирование
- исследуется функционирование мембран , функции органоидов , механизмы возникновения и проведения возбуждения , возникновение мышечного сокращения , биофизические особенности клеток и др
7. Микрохирургические методы
· применяется для генетических , эмбриологических и физиологических исследований , для извлечения частей клетки и их последующего биохимического анализа
· микрооперации производятся с помощью прибора микроманипулятора и при большом увеличении микроскопа ( пересадка ядер , хлоропластов , слияние протопластов , пересадка фрагментов зародышевых слоёв зиготы , гибридизация соматических клеток и др .)
8. Метод культуры клеток и тканей
· выращивание выделенных из организма клеток или тканей на искусственных стерильных питательных средах
· культура клеток и тканей - модель для изучения процессов формирования органелл , депонирования запасных органических соединений , роста клеточных оболочек , биосинтеза физиологически активных веществ и т . п .
9. Рентгеноструктурный анализ
· основан на дифракции рентгеновских лучей при прохождении через вещества с упорядоченной структурой ( лежит в основе расшифровки структуры ДНК , гемоглобина , миоглобина , коллагена и др . биологических веществ