Определение аминокислот методом тонкослойной хроматографии. Пробу белка предварительно гидролизуют. Хроматографируют гидролизат, растворенный в этаноле.
Разделение аминокислот ведут в буферных растворах на Витмане №3 или на пленках с ионообменным слоем. Оба сорбента подвергаются специальной обработке: пленку на 3 ч погружают в цитратный буферный раствор (0,004 М цитрат натрия рН = 3,2), затем высушивают при комнатной температуре. Капли пробы и стандартных аминокислот наносят на стартовую линию на пленке, помещают в хроматогграфическую камеру (почти вертикально), на дно которой налит буферный раствор, подогретый до 50ºС. Через заданное время пленку вынимают, сушат, опрыскивают проявителем (нингидрином), определяют Rf и после обработки растворителем фотометрируют при 570 нм. Методика На стартовую линию пластинки наносят 2 (10) мкл гидролизата пробы, а слева и справа на расстоянии 2 см (от места ввода пробы) – столько же стандартного раствора аминокислоты (0,1%- ный раствор смесиаминокислот: аргинина, лизина, гистидина, фенилаланина, тирозина, лейцина, изолейцина, метионина, валина, пролина, аланина, глицина, глутаминовой кислоты, треонина, серина и аспарагиновой кислоты в 0,01М HCl). Через 10 минут пленку помещают в ХГ камеру с нитратным буфером (буферный раствор рН=3,3. В 1 литре дистиллированной воды растворяют 84 г моногидрата лимонной кислоты, 16 г NaOH, 5,9 мл HCl ρ = 1,19), так чтобы уровень жидкости был ниже линии старта.
Через 2 ч, когда фронт растворителя достигнет верхнего края пленки, ее вынимают, сушат в течение 9 минут при 105 ºС, опрыскивают раствором нингидрина (проявитель. К 0,2 г нингидрина в 95 мл метанола добавляют 5 мл 2,4,6 - коллидина), выдерживают 10 минут при 105 ºС. Пятна можно стабилизировать ацетатом кадмия, затем высушить 5 минут при той же температуре. 3.2.