Опыт 1. Биуретовая реакция
Биуретовая реакция основана на образовании комплексного соединения меди с енолизированными пептидными группами белков.
Ход работы
К 1 мл разбавленного раствора белка прибавляют 2 мл 30 % раствора NaOH, тщательно перемешивают и добавляют 2 – 3 капли 1 % раствора CuSO4, снова перемешивают. Наблюдают появление _____________________ окраски.
Вывод
Опыт 2. Ксантопротеиновая реакция Мульдера
Ксантопротеиновая реакция основана на нитровании радикалов ароматических аминокислот.
Ход работы
К 1 мл белка прибавляют 5 – 6 капель концентрированного раствора HNO3 до появления белого осадка. При нагревании в пламени спиртовки раствор и осадок окрашиваются в ______________ цвет. Смесь охлаждают и осторожно по каплям, не взбалтывая, добавляют избыток NaOH. Наблюдают появление _________________ окраски.
Вывод
Опыт 3. Реакция Шульце-Распайля
В результате гидролиза сахарозы и дегидратации продуктов гидролиза под действием серной кислоты образуется фурфурол, который в комплексе с триптофаном дает окрашенное соединение.
Ход работы
К 5 каплям раствора белка или сыворотки крови прибавить 5 капель 5% раствора сахарозы и осторожно наслоить концентрированную серную кислоту. Отметить цвет кольца на границе раздела. Осторожно встряхнуть содержимое пробирки. Наблюдают появление _______________________ окрашивания.
Вывод
Опыт 4. Обнаружение белка в образцах биологических тканей
с помощью биуретовой реакции
Ход работы
Готовят 3 пробирки: в первую пробирку наливают 1 мл воды, во вторую – 1 мл разбавленной в 500 раз сыворотки крови, в третью – 1 мл 1 % гомогената мышечной ткани. Затем в каждую из трех пробирок приливают по 2 мл 30 % раствора NaOH, тщательно перемешивают и добавляют 2 – 3 капли 1 % раствора CuSO4, снова перемешивают. Отмечают изменения.
Результаты заносят в таблицу:
| Исследуемый образец | Наблюдения | Выводы |
Контрольные задачи
1. Глобулярные белки характеризуются определенным расположением специфических аминокислот. Исходя из обобщений, сделанных по данным рентгеноструктурного исследования миоглобина и других простых глобулярных белков небольших размеров, укажите наиболее вероятное расположение (внутри или на поверхности молекулы нативного глобулярного белка) аминокислотных остатков аспарагиновой кислоты, лейцина, серина, валина, глутамина, аргинина.
2. Составьте структурную формулу пептида гли-сер-тир-лей-мет
3. Олигомерный белок массой 660 мг обработали избытком 2,4-динитрофторбензола в слабощелочных условиях до завершения химической реакции. Затем пептидные связи были подвергнуты гидролизув присутствии концентрированной соляной кислоты и при нагревании. В результате в гидролизате было обнаружено 5,5 мг 2,4-динитрофенильного производного валина. Рассчитайте число пептидных цепей в белке, молекулярная масса которого 132000.
Занятие № 2
Физико-химические свойства белков. Методы выделения и очистки белков.
Вопросы для подготовки
- физико-химические свойства белков: кислотно-основные, растворимость, изоэлектрическая точка белков, денатурация белка
- методы выделения и очистки белков – гомогенизация, экстракция, высаливание, гель-фильтрация, ионообменная хроматография, аффинная хроматография, электрофорез, тонкослойная хроматография; заполнить таблицу в тетради
| Название метода | Принцип метода |
Лабораторная работа