Для решения поставленных задач используются следующие методы:
1. Фотометрический. Исследуется степень поглощения света при определенной длине волны окрашенным раствором (колориметрия) или рассеивание света взвесью (нефелометрия). Относится к числу наиболее распространенному методу.
2. Флуориметрический.Концентрацию вещества данным методом можно определить в следующих случаях:
а) вещество само способно флуоресцировать т.е. при облучении светом определенной длины волны начинает испускать световые волны с другой длиной волны.
б) или вещество способно образовывать флуорогенные комплексы с каким-либо соединением.
Флуориметрией определяют содержание некоторых гормонов, витаминов, биогенных аминов (гистамин, серотонин).
3. Электрофорез - основан на различной скорости перемещения частиц в постоянном электрическом поле в зависимости от молекулярной массы и заряда. Используется для разделения и определения содержания белковых фракций сыворотки крови, изоферментов, липопротеидов.
4. Хромотография.Используется для разделения и количественного определения веществ на основании их растворимости в разных дозах. В клинике применяется для разделения и определения качественного и количественного состава аминокислот в биологических жидкостях, содержание гликозилированного гемоглобина.
5. Иммунохимический анализ. Метод достаточно широко применяется в практике. Основан на реакции взаимодействия антиген - антитело, причем антигеном является исследуемое вещество.
При определенных условиях антитела реагируют с высоким сродством только с тем антигеном, против которого выработан, что обуславливает чувствительность и специфичность метода.
Методы иммунохимического анализа подразделяются на радиоиммунный (РИА-радиоактивная метка), иммуноферментный (ИФП - метка-фермент) и реакции иммунофлюоресценции (РИФ - флюорогенная метка).
В настоящее время применяется для определения содержания гормонов, ферментов, опухолевых маркеров в сыворотке крови и др.
Применяются также и другие методы клинико-биохимических исследований - рН-метрия, рефрактометрия, поляриметрия, полярография.
Используя данные методы, можно определить содержание различных субстратов, гормонов, активность ферментов и т.д. и получить довольно объемную информацию о состоянии обменных процессов, характеризующих состояние здоровья или отклонение от нормы.
Зависимость между состоянием здоровья человека и характером изменений биохимических процессов может быть представлена в виде графика.
В состоянии "здоровья" происходят колебания количественных биохимических параметров в определеных физиологических пределах. Под действием внешних и внутренних этиологических факторов болезни наблюдается нарушение границ нормальных значений. Эту первую стадию можно обозначить как предсимптоматическую (латентную). Клинические и субъективные признаки не выявляются, однако, имеются вполне регистрируемые изменения некоторых биохимических параметров обмена веществ (например, скрытая форма диабета). С появлением первых признаков (субъективных и клинических) болезнь проявляется и прогрессирует (симптоматическая стадия и момент постановки диагноза), далее терапия и выздоровление.
Дальнейшее совершенствование медицинской помощи возможно только при широком клинико-лабораторном обследовании пациентов на современном уровне. Только при участии диагностической лаборатории возможно повышение эффективности диагностики, контроля за лечением, диспансеризация населения, профилактика заболеваний, выявление пограничных состояний и групп риска. От мощности клинико-диагностической лабораторной службы во многом зависит продолжительность диагностического периода пребывания больного на койке и, следовательно, эффективность и своевременное лечение.