Принцип метода.Метод основан на титровании избытка перекиси водорода, нерасщепленного каталазой, перманганатом калия в кислой среде.
5Н2О2 + 2КМnО4 + 3Н2SО4 → 8Н2О + 5О2 + К2SО4 + 2MnSО4
Активность каталазы выражается каталазным числом, которое представляет собой количество перекиси водорода в миллиграммах, разложенной 1 мл3 крови за 30 минут. Показателем каталазы называют соотношение каталазного числа к количеству миллионов эритроцитов в 1 мкл исследуемой крови.
Ход работы.С помощью микропипетки берут кровь из пальца человека или хвоста/уха экспериментального животного и готовят гемолизат крови, разводя ее в 1000 раз в мерной колбе (0,1 мл в 100 мл дистиллированной воды).
В 2 колбочки или широкие пробирки отмерить по 7 мл дистиллированной воды и по 2 мл 1% раствора пероксида водорода. В опытную колбу/пробирку прилить 1 мл разведенной в 1000 раз крови. Обе колбы/пробирки – опытную и контрольную – оставить на 30 минут при комнатной температуре. По истечении указанного времени в обе пробы добавить по 3 мл 10 % раствора серной кислоты, которая прекращает действие каталазы. Содержимое опытной и контрольной проб оттитровать 0,1 н раствором перманганата калия до слабо-розового цвета.
Расчет.Допустим, что на титрование опытной пробы пошло 4,5 мл 0,1 н раствора КМnО4, а контрольной – 12,6 мл 0,1 н раствора КМnО4. 0,1 н раствора КМnО4 соответствует 1 мл 0,1 н Н2О2, а 1 мл Н2О2 соответствует 1,7 мг Н2О2. Следовательно, в данном случае каталазное число соответствует: (12,6 – 4,5) × 1,7 = 13,77 единиц.
Показатели нормы.Каталазное число крови у людей колеблется в пределах от 11 до 20 единиц. В клинике чаще используется показатель каталазы, который в норме составляет 2-3×10-6.
Клинико-диагностическое значение.Высокая активность каталазы наблюдается при пернициозной и макроцитарной анемии, а также при введении в организм кофеина, ацетоновых тел, алкоголя. Активность каталазы в крови снижается при ряде заболеваний: раке, анемии, туберкулезе и др.