Работа № 1. Выделение гликогена из мышечной ткани.

Принцип метода.При экстракции используется способность гликогена к растворению в кислой среде. Применение трихлоруксусной или хлорной кислот в качестве экстрагирующего агента одновременно с выделение гликогена дает возможность освободить раствор от примесей белков, нуклеиновых кислот и других полимеров. Гликоген, подобно белкам, обладает резко выраженными гидрофильными свойствами, поэтому его можно легко осадить из раствора путем высаливания солями щелочных и щелочно-земельных металлов, солями тяжелых металлов, этиловым спиртом.

Ход работы.Забить животное, быстро выделить 5 г мышечной ткани и поместить в фарфоровую ступку, вмороженную в лед. Ткань измельчить, залить 2 мл 5% раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ) и растереть пестиком. Добвить еще 3 мл 5% раствора ТХУ и вновь тщательно растереть пестиком. Полученную кашицу отцентрифугировать при 3000 об/мин, после чего перенести в 2 пробирки по 1 мл надосадочной жидкости. С одной из пробирок провести йодную пробу на гликоген, добавив 2-3 капли реактива Люголя. Отметить появление характерной красно-бурой окраски раствора. Во вторую пробирку прилить 1 мл 10% раствора ацетата свинца и отметить выпадение осадка.