Работа № 5. Тонкослойная хроматография липидов ткани мозга.

Для исследования взять 250 мг ткани мозга, смешать с 5 – 10 мл свежеприготовленной смеси хлороформа и метанола (2:1), поместить в мерную колбу с притертой крышкой на 25 мл и энергично встряхивать содержимое колбы в течение 3 – 5 мин. Довести объем раствора хлороформ-метаноловой смесью до 25 мл (до метки), перемешать и через 5 – 10 мин отфильтровать через обезжиренный бумажный фильтр в колбочку, выпарить досуха на кипящей водяной бане и растворить осадок в 1 мл хлороформа.

0,01 мл хлороформного экстракта нанести на пластинку с силикагелем на расстоянии 1,5 см от нижнего края. Кроме того, на линию старта на нанести в качестве «свидетелей» на расстоянии 1 см друг от друга хлороформные экстракты холестерина, моно-, ди- и триглицеридов.

Поместить пластинку в камеру так, чтобы ее нижний край был погружен в растворитель, состоящий из смеси гексана, диэтилового эфира и уксусной кислоты в соотношении 73:25:2. Хроматографию проводить в течение 50 мин при комнатной температуре. Затем пластинку вынуть, высушить на воздухе и проявить в специальной камере, опрыскивая из пульверизатора 10% спиртовым раствором фосфорномолибденовой кислоты.

После опрыскивания нагреть пластинку в сушильном шкафу до 80 - 100ºС и отметить появление синих пятен на желтом фоне. Как правило, на хроматограмме обнаруживается 8 пятен, расположенных от линии старта в следующем порядке: 1 – фосфолипиды; 2 – неидентифицированные соединения; 3 – холестерин; 4 – моноглицериды; 5 – диглицериды; 6 - свободные жирные кислоты; 7 – триглицериды; 8 – эфиры холестерина.

Внести в тетрадь схему хроматограммы.