В ткани мозга содержатся специфическая и неспецифическая холинэстеразы. Специфическая – гидролизует ацетилхолин, неспецифическая – помимо ацетилхолина гидролизует бутирил- и бензоилхолины.
Взвесить на торсионных весах 100 – 200 мг ткани серого вещества больших полушарий или коры мозжечка (ферментативная активность сохраняется на холоду в течение 1 – 2 недель). Навеску ткани растереть в ступке в 50-кратном количестве дистиллированной воды до образования равномерно опалесцирующей взвеси. Осадок из раствора перенести в 2 пробирки и добавить по 3 мл дистиллированной воды. В первую - контрольную – добавить 1 мл индикаторно-буферного раствора № 1 (200 мг бромтимолового синего растереть в ступке с 20 мл 0,1 н раствора NaOH). Контрольный раствор перенести в мерную колбу на 1 л, добавить 50 мл 0,1 М раствора борной кислоты в 0,1 М растворе KCl. Содержимое колбы довести до метки свежей дистиллированной водой. Раствор имеет насыщенный синий цвет и рН 8,4, стоек при хранении. Во вторую – опытную - пробирку добавить 1 мл индикаторно-буферного раствлора №2 (к 1,8 мл индикаторно-буферного раствора №1 добавить 0,2 мл 1% раствора ацетилхолина или 0,2 мл 1,57% раствора бутирилхолинйодида, или 1,1% раствора бутирилхолинхлорида. Готовить раствор следует не раньше, чем за 3 часа до опыта).
Обе пробирки поставить в термостат при температуре 38ºС на 15 мин, при необходимости – дольше. В результате ферментативного расщепления субстрата наблюдается постепенное освобождение уксусной/масляной кислоты и изменение окраски индикатора от синего или сине-зеленого в опытной пробирке к желтой.