Принцип метода.Метод основан на окислении гидроксипролина пероксидом водорода в присутствии ионов меди (II) в щелочной среде до пиррола. Пиррол образует розовое окрашивание с парадиметиламинобензальдегидом в кислой среде. Интенсивность окрашивания раствора пропорциональна концентрации оксипролина.
Ход работы.В две пробирки (контроль и опыт) отмерить по 1 мл профильтрованной мочи, добавить по 1 мл 0,01 М раствора сернокислой меди, по 1 мл 2,5 М раствора NaOH и по 1 мл 6% раствора пергидроля. После перемешивания обе пробирки поместить на 10 мин в водяную баню при 70оС и периодически помешивать. Пробы охладить в воде со льдом (снегом), добавить в каждую пробирку по 4 мл 3 н раствора серной кислоты и по 2 мл реактива Эрлиха (5% раствор п-диметиламинобензальдегида в пропаноле или изопропаноле). Контроль оставить в воде со льдом, опыт нагреть до 100оС и кипятить в течение 80 сек. В опытной пробирке развивается розовое окрашивание. Содержимое обеих пробирок колориметрировать на ФЭКе при зеленом светофильтре в кюветах на 10 мм. Из экстинкции опыта вычесть экстинкцию контроля и по калибровочному графику найти содержание оксипролина в 1 мл мочи. Вычисляют количество оксипролина в 100 мл или суточном количестве мочи.
Норма.У взрослого человека с мочой за сутки выводится до 8 мг свободного оксипролина.
Клинико-диагностическое значение. Содержание оксипролина в крови и моче характеризует интенсивность катаболизма коллагена и скорость обмена этой аминокислоты. Оксипролин может находиться в связанном виде с белками, пептидами, а также в свободном состоянии в сыворотке крови и моче. Резко увеличивается экскреция гидроксипролина с мочой при коллагенозах (ревматизм, ревматоидный артрит, системная склеродермия, дерматомиозит), при гиперпаратиреоидизме, болезни Педжета (до 1 г за сутки). Еще больше выделяется оксипролина при наследственной гипергидроксипролинемии, что обусловлено дефицитом фермента гидроксипролиноксидазы, в результате чего и нарушается обмен гидроксипролина.