Работа № 5. Определение липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) в сыворотке крови турбидиметрическим методом.

Клинико-диагностическое значение.Содержание ЛПНП (b-липопротеинов) в крови колеблется в зависимости от возраста, пола и составляет в норме 3-4,5 г/л. Увеличение концентрации ЛПНП наблюдается при атеросклерозе, механической желтухе, острых гепатитах, хронических заболеваниях печени, сахарном диабете, гликогенозах, ксантоматозе и ожирении.

Принцип метода. Метод основан на способности ЛПНП образовывать с гепарином комплекс, который под действием хлорида кальция выпадает в осадок. По степени помутнения раствора судят о концентрации ЛПНП в сыворотке крови.

Ход работы. 1. В пробирку вносят 2 мл раствора хлорида кальция и 0,2 мл сыворотки крови. Содержимое пробирки перемешивают.

2. Определяют оптическую плотность раствора (Е1) против раствора хлорида кальция при красном светофильтре (630нм) в кювете на 0,5 см.

3. Раствор из кюветы переливают в пробирку, добавляют микропипеткой 0,04 мл 1% раствора гепарина и точно через 4 мин снова определяют оптическую плотность раствора (Е2) в тех же условиях.

4. Рассчитывают концентрацию ЛПНП (с, г/л) по стандартной формуле:

С = (Е2- Е1) х 10, где 10 – эмпирический коэффициент