Работа позволяет качественно обнаружить наличие липазы в панкреатическом соке и дать количественную оценку ее действия.
Принцип метода. Метод основан на нейтрализации щелочью жирных кислот, образующихся при гидролизе жира ферментом липазой. Активность липазы определяется так называемым “липазным числом”, т.е. количеством мл 0,1н раствора КОН, идущего на нейтрализацию свободных жирных кислот, образующихся в результате гидролиза жира молока под влиянием 1 мл ферментного раствора (панкреатического сока).
Ход работы. Отмерить в 2 пробирки по 4 мл молока, 5-8 капель фенолфталеина и добавить одинаковое количество 0,1н раствора КОН до появления красной окраски (щелочь нейтрализует всю кислотность молока). После этого в одну пробирку добавить 2 мл предварительно прокипяченного панкреатического сока, в другую - некипяченого. Обе пробирки сверху залить 0,5 мл толуола для защиты от поглощения СО2 и поместить в термостат при 38°С на 30 мин. По истечении указанного времени пробирки вынуть, охладить и отметить обесцвечивание в пробирке с активным ферментом (щелочь нейтрализуется образующимся в результате гидролиза органическими кислотами). Содержимое этой пробирки оттитровать 0,1н раствором КОН до одинаковой окраски со второй пробиркой.
Расчет. Для определения липазного числа надо количество мл 0,1н раствора КОН, пошедшего на титрование, разделить на 2, т.е. на число мл ферментного раствора (панкреатического сока), взятого в опыт.