Принцип метода. Триацилглицерины (ТАГ) омыляются гидроксидом калия с образованием глицерина, при окислении которого образуется формальдегид. Реактив, содержащий ацетилацетон, взаимодействует с формальдегидом с образованием окрашенного продукта, интенсивность окраски которого определяют фотометрически.
Ход определения. ТАГ определяют, внося реактивы в 3 пробирки с притертой пробкой в следующей последовательности:
| Раствор, мл | |||
| Компоненты | опытная проба | эталонная проба | контрольная проба |
| Сыворотка крови, мл | 0,1 | - | - |
| Эталонный раствор триолеина, мл | - | 0,1 | - |
| Дистиллированная вода, мл | - | - | 0,1 |
| Изопропанол, мл | |||
| Перемешивают и добавляют мерной ложечкой адсорбент | |||
| 0,4 г | 0,4 г | 0,4 г | |
| Встряхивают на смесителе в течение 15 мин. | |||
| Центрифугируют при 3000 об/мин 5 мин. В 3 пробирки: | |||
| Надосадочная жидкость, мл | |||
| Раствор КОН, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
| Инкубируют в водяной бане при 60°С в течение 15 мин. | |||
| Охлаждают в холодной воде | |||
| Окислительный раствор, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
| Оставляют на 10 мин. при комнатной температуре | |||
| Реактив на формальдегид (ацетилацетон), мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
| Инкубируют в водяной бане при 60°С в течение 30 мин. |
После охлаждения измеряют оптическую плотность опытной (Ео) и эталонной (Еэ) проб против контрольной пробы на ФЭКе при длине волны 410 нм в кюветах на 10 мм.
Расчет. Содержание ТАГ рассчитывают по формуле:
Х =Ео/Еэ×3,39
где Х - содержание ТАГ в сыворотке крови, ммоль/л,
Ео и Еэ - оптическая плотность опытной и эталонной проб,
3,39 - пересчетный коэффициент.
Сопоставить с нормой содержания ТАГ в сыворотки крови у здоровых людей и сделать вывод.
В норме содержание ТАГ в сыворотке крови составляет 0,15-1,71ммоль/л или 0,5-1,5 г/л;
погранично-высокая триацилглицеринемия – 1,5-2,0 г/л (1,71-2,3 ммоль/л);
высокая (выраженная) гипертриглицеринемия-2,0-5,0 г/л (2,3-5,6 ммоль/л);
очень высокая (тяжелая) гипертриглицеринемия > 5,0 г/л (> 5,6 ммоль/л).
Клинико-диагностическое значение определения ТАГ в сыворотки крови. Наибольшее значение имеет определение содержание ТАГ в крови для установления типа дислипопротеинемий. Повышение содержания ТАГ в крови (гипертриацилглицеринемия) отмечается при гиперлипопротеинемии I, IIб, III, IV и V типов, беременности, ожирении, вирусном гепатите, гипертонической болезни, ишемической болезни сердца, геморрагической лихорадке, нефротическом синдроме, алкоголизме, жировой инфильтрации печени, алкогольном и билиарном циррозе печени, панкреатите, гликогенозах I, III и VI типов, сахарном диабете, гипотиреозе и др.
Снижение содержания ТАГ в крови(гипотриацилглицеринемия) может быть выявлено при гипо- и абеталипопротеинемии, хронической обструктивной болезни легких, инфаркте мозга, гипертиреозе, лактозурии, недостаточности питания, синдроме мальабсорбции, терминальной стадии поражения паренхимы печени.