Принцип метода.Способ основан на определении концентрации общего холестерина в пробах сыворотки крови до осаждения атерогенных апо-В-содержащих липопротеинов (ЛПОНП, ЛПНП и их «ремнанты») и после такового α-холестерина (холестерина ЛПВП) в супернатанте с дополнительным расчетом холестеринового коэффициента (индекса) атерогенности.Содержащиеся в сыворотке кровиЛПОНП и ЛПНП образуют нерастворимые комплексы с фосфорновольфрамовой кислотой и ионами магния, полученная после осаждения преципитата надосадочная жидкость используется для определения холестерина ЛПВП (ЛПВП-ХС).
Ход работы. К 1,0 мл сыворотки крови прилить 0,1 мл MgCl2 на 4% водном растворе фосфорновольфрамовой кислоты. Инкубировать в течение 30 мин при 40С (в ледяной воде) с целью полного выпадения в осадок ЛПОНП и ЛПНП. Центрифугировать пробу в течение 15 мин при 3000 об/мин. В супернатанте определить содержание α-холестерина (ЛПВП-ХС). Для этого в сухую пробирку поместить 2,1 мл реактива Либермана-Бурхарда и осторожно по стенке пробирки добавить 0,1 мл супернатанта и далее проводить определение как описано в работе № 1.
По разнице содержания холестерина в цельной крови (общий ХС, см. работу №1) и в ЛПВП рассчитать уровень холестерина фракций ЛПОНП и ЛПНП.
Расчетхолестеринового коэффициентаатерогенности (Кхс) произвести по формуле:
Кхс = Общий ХС – ЛПВП-ХС
ЛПВП-ХС
Клинико-диагностическое значение.Оптимальный уровень ЛПВП-ХС (α-холестерина) 0,4-0,6 г/л. Определение уровня ЛПВП-ХС способствует выявлению риска развития ИБС. Снижение уровня ЛПВП-ХС на каждые 0,05 г/л ниже среднего ведет к увеличению риска развития ИБС на 25 %. Повышенный уровень ЛПВП-ХС расценивается как антиатерогенный фактор.
Следует учитывать, что изменение содержания ЛПВП-ХС может наблюдаться при ряде заболеваний и состояний. Так, повышение уровня ЛПВП-ХС отмечается при первичном билиарном циррозе печени, хроническом гепатите, алкоголизме, хронических интоксикациях. Снижение уровня ЛПВП-ХС наблюдается при сахарном диабете, заболеваниях почек и печени, гиперлипопротеинемии IV типа, острых бактериальных и вирусных инфекциях.
Для определения тактики лечения и профилактики возникновения ИБС важно совместно оценивать уровень в сывортке крови общего холестерина и ЛПВП-ХС. Индекс атерогенности Кхс, который в норме у здоровых лиц варьирует в пределах 2-4, более точно отражает благоприятное и неблагоприятное сочетание липопротеинов (ЛП) с точки зрения риска развития ИБС и атеросклероза, так как характеризует отношение атерогенных ЛП к содержанию антиатерогенных ЛП в сывортке крови. Этот коэффициент у новорожденных не более 1, достигает 2,5 у здоровых мужчин 20-30 лет и 2,2 – у здоровых женщин того же возраста; у мужчин 40-60 лет без клинических проявлений атеросклероза от3 до 3,5; у лиц с ИБС он больше 4, нередко достигая 5-6; у лиц старше 90 лет не превышает 3.