Принцип метода.О протеолитической активности желудочного сока судят по количеству образующихся при расщеплении казеина неосаждаемых ТХУ пептидов, концентрация которых соответствует концентрации определяемого в них тирозина.
Техника выполнения работы.В две центрифужные пробирки отмерить по 1 мл желудочного сока, разведенного в 10 раз. В опытную пробирку добавить 1 мл 5 % раствора казеината натрия, в контрольную – 2 мл 5 % ТХУ. Содержимое пробирок перемешать, поместить в термостат при температуре 38° С на 20 мин. После термостатирования в контрольную пробу добавить 1 мл 5 % раствора казеината натрия, в опытную – 2 мл 5 % ТХУ. Выдержать 15 мин, далее центрифугировать 15 мин при 3000 об/мин. После этого отобрать в 2 биологические пробирки по 1 мл центрифугата (надосадочной жидкости) и по 5 мл 0,5 н раствора Na2CO3. При перемешивании в обе пробирки добавить по 1 мл реактива Фолина и выдержать 20 мин.
Оптическую плотность опытного раствора измерить на ФЭКе при длине волны 760 нм (красный светофильтр) в кювете толщиной 10 мм против контроля. Концентрацию тирозина (Стир) найти по калибровочному графику. Рассчитать активность по формуле:
А= 2× Стир (мкМ/мл мин).
В норме протеолитическая активность желудочного сока равна 0,15-0,5 мкМ/мл мин.