Метод основан на способности пепсина в определенных условиях расщеплять белковую молекулу гемоглобина с освобождением тирозина и триптофана. По концентрации последних судят о пептической активности желудочного сока или мочи. Около 1% пепсиногена, вырабатываемого клетками слизистой оболочки желудка, поступает в кровь и выводится почками с мочой в виде уропепсиногена.
Техника проведения работы.Определение уропепсина.
Из суточного количества мочи отбирают 20 мл, помещают в градуированный цилиндр, подкисляют раствором соляной кислоты до pH 1,5 и доводят дистиллированной водой до 25 мл. Таким же путем доводят раствор гемоглобина до pH 1,5. В пробирку отмеривают 1 мл подкисленной мочи, добавляют 5 мл раствора гемоглобина, перемешивают и выдерживают на водяной бане при 37* в течение 30 мин. Затем добавляют 10 мл 5% раствора ТХУ, перемешивают, фильтруют и в фильтрате определяют тирозин. Для этого к 2 мл фильтрата добавляют 5 мл дистиллированной воды, 8 мл раствора щелочи и 3 мл реактива Фолина, предварительно разведенного водой в 3 раза. После добавления последнего развивается голубая окраска. Через 30 мин на ФЭКе определяют оптическую плотность при длине волны 580 нм. Опыт сравнивают с контролем, в контроле моча заменяется дистиллированной водой. Расчет содержания пепсиногена в суточном количестве мочи производят по формуле:
П сут =20×Д×V×X (Ед/24часа),
где Д- оптическая плотность опытного раствора; X- количество тирозина в мг, которое определено по калибровочной кривой ; V- объем мочи за 24 часа.
Определение пепсина в желудочном соке производят аналогичным способом, с той лишь разницей, что для исследования берут 5 мл желудочного сока. Расчет производят на 100 мл желудочного сока.