Требования к чистоте бактериологической посуды - раздел Химия, «ОРГАНИЗАЦИЯ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ ЛАБОРАНТА ХИМИКО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА» Учебное пособие Посуда Для Бактериологических Работ Должна Быть Чистой, А Для Многих Исследов...
Посуда для бактериологических работ должна быть чистой, а для многих исследований — и стерильной, так как использование загрязненной, плохо вымытой посуды может привести к получению неправильных результатов. Для мытья лабораторной посуды в микробиологических лабораториях отводится отдельное помещение — моечная или специальное рабочее место, которое обеспечивается большой раковиной с подводкой горячей и холодной воды, нагревательными приборами: газовой или электрической плитой.. В моечной необходимо иметь кастрюли, тазы, ведра, ерши, щетки и доски с колышками для сушки чистой посуды. На дно раковины кладут густую металлическую сетку, чтобы предупредить засорение канализационной сети частицами агара, ватой, бумагой, попадающими в воду при мытье посуды. ,В процессе мытья на посуду воздействуют механическими и химическими факторами. К числу первых относится удаление грязи с помощью щеток и ершей. При отсутствии ершей или невозможности их использования, например в случае несоответствия ерша размеру сосуда, посуду моют с помощью мелко нарезанных кусочков бумаги, соломы или сена. При этом загрязнение, имеющееся на внутренних стенках, удаляется механически. Наилучшие результаты мытья посуды отмечаются в том случае, когда воздействие механических факторов сочетается с действием химических веществ.
Поэтому ерши, которыми моют посуду, предварительно погружают в соду, полужидкое мыло, мыльный раствор или стиральный порошок. Надписи, сделанные на стекле восковым карандашом, легко снимаются щеткой либо кусочком влажной марли с меловым порошком или содой. Для устранения налета белого цвета, нередко появляющегося на стекле, посуду помещают на 30—40 мин в 5— 10% раствор хлористоводородной кислоты. Сильно загрязненную посуду со следами жира обрабатывают в хромовой смеси. Хромовая смесь, будучи сильным окислителем, разрушает органические вещества с образованием растворимых или газообразных продуктов.
Перед употреблением хромовую смесь подогревают до температуры 45—50°С, а затем заливают ею грязную посуду. Мытье новой лабораторной посуды. В ведре с теплой водой растворяют хозяйственное мыло, чтобы образовалось небольшое количество пены, погружают в нее посуду и ставят на слабый огонь. После 15-минутного кипячения посуду вынимают, ополаскивают чистой водой, погружают в теплый 1—2% раствор хлористоводородной кислоты, доводят до кипения и вываривают 10—15 мин, чтобы нейтрализовать избыток щелочи, который мог остаться при изготовлении стекла. После кипячения в кислоте посуду прополаскивают водопроводной водой и дважды дистиллированной. При мытье посуды, служащей для постановки серологических реакций, кислоты и щелочи использовать не рекомендуется, так как даже следы этих веществ, оставшиеся на стенках, могут исказить результат реакции.
Такую посуду моют горячей водой, кладут на сетки, чтобы с нее стекла вода, за тем несколько раз ополаскивают дистиллированной водой и сушат в сушильном шкафу. Мытье лабораторной посуды, бывшей в употреблении. Посуда, в которой содержался зараженный материал, поступает в мойку после предварительной дезинфекции, гарантирующей гибель находящихся в ней патогенных микробов. Перед мытьем из пробирок, чашек и матрацев обеззараженную жидкость выливают в канализацию. Не очень загрязненную посуду моют ершом в горячей воде с мылом, содой или в растворе горчицы. Посуду со следами агара, желатина или другой питательной среды за сутки перед мытьем заливают 2—5% раствором едкого натра или едкого кали.
Очень загрязненную жирную посуду, не поддающуюся мытью обычным способом, заливают на 30—40 мин хромовой смесью, а затем в течение продолжительного времени промывают проточной водопроводной водой. Простой и надежный способ мытья и обеззараживания лабораторной посуды предложен Г. П. Кирсановым (1972). Отработанную лабораторную посуду (пробирки, чашки Петри, предметные стекла с мазками после иммерсионной микроскопии и пр.) стерилизуют в автоклаве в течение 2 ч при 2 атм. После стерилизации посуду загружают в бак и заливают раствором, содержащим на 100 мл дистиллированной воды 5 мл нашатырного спирта и 3 г порошка для стирки хлопчатобумажного и льняного белья в механизированных прачечных (изготовитель — Казанский химкомбинат имени Вахитова, ВТУ 18/37-64). Лабораторная посуда хорошо отмывается и обезжиривается в течение 30 мин кипячения в указанном растворе, затем ее прополаскивают водопроводной водой и дважды дистиллированной. После этого посуду высушивают в сушильном шкафу. Для обработки посуды, применявшейся для выращивания микобактерий туберкулеза на яичных питательных средах, А. В. Ивановым предложен простой и экономичный способ. Использованные пробирки со средами автоклавируют при 1,5 атм в течение 30 мин, затем по 250— 300 пробирок укладывают в бачки или эмалированные ведра с плотной крышкой, заливают раствором едкого натра и кипятят 2 ч. Во время кипячения остатки питательной среды растворяются и образуется однородная жидкая мыльно-щелочная смесь, способствующая освобождению пробирок от плотных остатков среды.
После 2 ч кипячения мыльно-щелочной раствор переливают в другое ведро для повторного использования (раствор может быть использован 3—4 раза). Прокипяченные отмытые пробирки несколько раз прополаскивают водопроводной водой и высушивают. Посуду, используемую для приготовления и хранения питательных сред и культивирования микробов, нельзя обрабатывать дезинфицирующими веществами, так как даже следы их делают питательную среду непригодной для размножения микроорганизмов. Мытье градуированных пипеток. Пипетки и другая градуированная посуда, поступающие для работы, должны быть абсолютно чистыми и хорошо обезжиренными. На стенках плохо обезжиренной посуды при вливании жидкости остается большое количество капель, вследствие чего слитый объем жидкости не будет соответствовать той величине, которая указана на шкале деления. Новые градуированные пипетки, не бывшие в употреблении, моют следующим образом.
С помощью резинового баллончика, надетого па пипетку, насасывают в нее горячую мыльную воду и погружают затем в сосуд с такой же водой. Чтобы вода из пипеток не вытекала, уровень жидкости в сосуде должен соответствовать высоте пипеток. Выдержав 20— 30 мин в мыльном растворе, пипетки прополаскивают водопроводной водой и переносят в 1—2% раствор хлористоводородной кислоты, который постепенно доводят до кипения. Далее пипетки обрабатывают так же, как и остальную стеклянную посуду. Пипетки, бывшие в употреблении, тщательно протирают тонкой упругой проволокой, на конец которой плотно накручивают кусочек ваты или марли в виде сливы. Для того чтобы загрязнения снимались быстрее и легче, пользуются горячей мыльной водой, раствором питьевой соды или стирального порошка. Закупорившийся канал пипетки прочищают мандреном от тонких игл шприцев.
Промытые пипетки складывают в таз, заливают теплым раствором горчицы или мыль-пой водой и ставят на слабый огонь. После 20—30-минутного кипячения пипетки вынимают и ополаскивают сначала теплой проточной водой, а затем дистиллированной. Сильно загрязненные пипетки также очищают вначале ершом с мылом или содой, а затем погружают в хромовую смесь, налитую в ванночку или банку, по высоте соответствующую длине обрабатываемых пипеток. В хромовой смеси пипетки выдерживают 20—30 мин, затем в течение нескольких минут промывают проточной и дважды ополаскивают дистиллированной водой. Мытье предметных и покровных стекол.
Предметные и покровные стекла должны иметь абсолютно чистую поверхность и быть хорошо обезжиренными. Капля воды, нанесенная на обезжиренное стекло, растекается равномерно, а на плохо обезжиренном стекле распадается на мелкие капельки. Предметные и покровные стекла рекомендуется мыть и ополаскивать в резиновых перчатках, чтобы не загрязнять их жиром, находящимся на поверхности кожи. Стекла предметные и покровные, не бывшие в употреблении, моют в теплой мыльной воде и после ополаскивания заливают смесью Никифорова. Если стекла, вынутые через 2—3 дня из смеси Никифорова, сохраняют следы жира, их складывают в фарфоровую чашечку, заливают 2— 5% раствором гидрокарбоната натрия или едкого натра, ставят на слабый огонь и кипятят, считая от момента закипания воды, в течение 20—30 мин. После кипячения в щелочном растворе стекла ополаскивают проточной водопроводной водой, опускают на 10—15 мин в 5—10% раствор хлористоводородной кислоты и затем промывают проточной водой.
Предметные и покровные стекла, бывшие в употреблении, загрязненные краской и иммерсионным маслом, обрабатывают следующим способом: 1) опускают на 2 ч в концентрированную серную кислоту или хромовую смесь, затем тщательно промывают проточной водопроводной водой; 2) заливают 5% раствором гидрокарбоната натрия или щелочи (едкое кали или едкий натр), ставят на слабый огонь и кипятит в течение 30—40 мин. Силиконирование лабораторной посуды. Тщательно вымытую и обезжиренную посуду высушивают и заливают на несколько минут при комнатной температуре 3% раствором полиметилсилоксановой жидкости (марка ПМС-200 или ПМС-300) в хлороформе. При этом на поверхности стекла образуется тончайшая органосиликоновая пленка с хорошими гидрофобными и адгезивными свойствами. Жидкость можно использовать многократно. Обработанную таким образом посуду помещают на '2 ч в сушильный шкаф при температуре 180—210°С После этого посуда готова к употреблению. Пленка не смывается водой и не разрушается кислотами.
Для ее удаления посуду следует в течение 2 ч кипятить в 10% растворе щелочи. Сушка и хранение чистой лабораторной посуды. Высушенную посуду просматривают на свет. Стекло ее должно быть совершенно прозрачным, без матового налета и пятен. Вымытую посуду не вытирают, а сушат при комнатной температуре (холодная сушка) или горячим воздухом в сушильном шкафу при температуре 100-105°С. Чисто вымытую и высушенную посуду, закрытую пробками с бумажными колпачками или без них, хранят в местах, надежно защищенных от пыли, лучше всего в плотно закрывающемся шкафу.
Все темы данного раздела:
И.С.Корешкова
«ОРГАНИЗАЦИЯ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ ЛАБОРАНТА ХИМИКО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА»
Учебное пособие
для студентов СПО
Техника безопасности в химической лаборатории
1. Работать одному в лаборатории строго запрещается.
2. Нельзя работать в лаборатории без халата. Он должен быть сшит только из хлопчатобумажной ткани.
3.На лабора
Правила поведения при несчастных случаях
1. При ожоге концентрированными кислотами необходимо промыть
обожженное место струей воды, а затем — 2 — 3%- ным раствором соды.
2. При ожоге едкими щелочами постр
Требования к помещению химической лаборатории
Помещение лаборатории должно быть по возможности просторным и светлым. Лабораторию не следует устраивать в таком месте, где по тем или иным причинам происходит вибрация здания, так как это мешает р
Требования к помещению бактериологической лаборатории.
Помещение бактериологической лаборатории должно быть светлым и просторным. Необходимо исключить возможность сквозняков. Специальное место отводится для окраски препаратов. Обязательным оборудов
Организация рабочего места в лаборатории.
Правильная организация рабочего места — залог продуктивной работы лаборанта, от которой зависит точность и надежность выполняемых анализов. Чувство комфортности, устранение физического неудобства и
Химическая посуда, используемая в анализе
Химическую посуду, предназначенную для работы в аналитической лаборатории, можно условно разделить на две группы: посуда общего назначения и посуда специального назначения. К посуде общего назначен
Крепление бюретки для титрования
Бюксы стеклянные(рис.4)с притертыми крышками служат длявзвешивания твердых и жидких веществ, а также для их хранения.
Эрленмейера
Колбы для отсасывания (Бунзена) и воронки для фильтрования (Бюхнера) (рис.10).Колба Бунзена—толстостенная колба конической формы с отростком в верхней части (для соединения с
Центрифугата от осадка
Пипетки мерные(градуированные пипетки и пипетки Мора)длинные узкие трубки с расширением в середине (рис. 15). На узкой верхней части имеется специальная метка. Мерн
Пипеткой
Стеклянные палочки для перемешивания(рис.20).Обычнаядлина таких палочек 15 - 20 см, диаметр около 4 мм. На конце, который немного оттянут, имеется небольш
Химические
технический угловой.
Холодильники(рис.25)служат для охлаждения и конденсации пар
Работа с платиновой посудой
В аналитической практике широко используется платиновая посуда (тигли, чашки и т. д.). Но платина — драгоценный металл, поэтому при работе с платиновой посудой следует соблюдать спе
Правила работы с платиновой посудой
1.Не забывайте, что платина — очень мягкий металл. Поэтому при работе с платиновой посудой требуется особая осторожность, так как даже от незначительного усилия она легко деформируе
Требования к чистоте химической посуды
Приступать к выполнению химического анализа можно только тогда, когда под рукой у химика-аналитика будет необходимый набор химической посуды. Обязательно и другое требование: посуда всегда должна б
Химические методы очистки посуды
Мытье хромовой смесью. Очень часто в лабораториях для мытья посуды применяют хромовую смесь, так как хромовокислые соли в кислом растворе являются сильными окислителями. Для приготовления хромовой
Смешанные способы мытья посуды
Наилучшим примером сочетания различных способов очистки является мытье бюреток. Процесс мытья бюретки очень кропотливый и трудоемкий.
Сначала бюретку, если это необходимо, тщательно протир
Сушка химической посуды.
Иногда вымытая посуда должна быть хорошо высушена. Сухая посуда нужна, когда работу необходимо проводить в отсутствие следов влаги (очень многие органические реакции).
Различают: а) методы
Методы сушки при нагревании
Сушка горячим воздухом. Для ускорения сушки можно обдувать посуду горячим воздухом. Иногда посуду сушат над электроплиткой или над коптящим «холодным» пламенем горелки.
Нагревание следует
Виды стерилизации бактериологической посуды.
Стерилизация в отличие от дезинфекции предусматривает в стерилизуемом объекте уничтожение всех вегетативных и споровых, патогенных и непатогенных микроорганизмов. Стерилизацию производят различными
Тиндализация.
Тиндализация — дробная стерилизация с применением температуры ниже 100°С, предложенная Тиндалем. Прогревание стерилизуемого материала производят в водяной бане, снабженной терморегулятором, по часу
Дезинфекция
Уничтожение патогенных микробов в объектах внешней среды называется дезинфекцией. В микробиологических лабораториях дезинфекционные мероприятия используются очень широко. Оканчивая работу с заразны
Приборы, используемые в химическом анализе
Баня водяная(рис. 29) -применяется для нагревания растворов до100°С. Бани, бывают, различных конструкций (круглая или четырехугольная) со съемными кольцами для разм
Аналитические весы
Основным и наиболее точным измерительным инструментом лаборатории химических методов анализа являются аналитические весы. Они позволяют взвешивать вещества с точностью до 0,0001 - 0,0002 г (при мак
Основные правила при работе с весами модели ВЛР-200
1.Приступая к взвешиванию, постарайтесь удобно сесть перед весами. От этого во многом зависит точность взвешивания. Сидеть нужно строго напротив весов, но, не напрягаясь, иначе вы быстро устанете.
И ПРАВИЛА РАБОТЫ В НЕЙ
Микробиологические лаборатории обычно снабжены следующим оборудованием:
1. Биологическими иммерсионными микроскопами с дополнительными приспособлениями и наборами необходимых красителей.
Микробиологические боксы
Бокс (боксированные помещения или помещения, оснащенные боксами биологической безопасности) - защищенное от пыли рабочее место, оборудованное установкой для горизонтального или вертикального ламина
Обслуживание и контроль
рН-метр градуируют в соответствии с инструкциями изготовителя, используя не менее двух стандартных буферных растворов, не раньше, чем за день до применения. Значения рН стандартных растворов должны
Питательные среды.
Известно значительное количество питательных сред, используемых для культивирования и поддержания (сохранения) микроорганизмов.
Питательной средой в микробиологии называют среды, содержащи
Основы приготовления питательных сред.
Питательные среды служат для выделения из исследуемого материала чистых культур микробов и изучения их свойств. Питательные среды являются основой бактериологических работ, нередко определяя своим
Техника посева микроорганизмов в жидкие питательные среды.
Посев микроорганизмов осуществляется бактериологической петлей. Отбор клеток микроорганизмов производят следующим образом. В правую руку берут петлю и стерилизуют ее нагреванием в пламени спиртовки
Техника посева микроорганизмов на агаризованную среду
Посев на скошенный агар в пробирках проводят следующим образом. Клетки микроорганизмов отбирают бактериологической петлей (как описано выше) и вводят петлю в пробирку со скошенной агаризованной сре
Техника культивирования анаэробных микроорганизмов
Граница между аэробными и анаэробными микроорганизмами является относительно условной. Хотя облигатными анаэробами обычно считают бактерии, рост которых невозможен в присутствии растворенного кисло
Поддержание (хранение) культур микроорганизмов.
Основная задача хранения культур – поддержание их жизнеспособности, сохранение стабильности таксономически важных признаков, а также определенных свойств, представляющих интерес для науки и практик
Различных методов их хранения
Род
бактерий
Частота пере-
севов,
месяцы
Время выживания, годы
Под мине-
ральным
маслом
В
стерил
Микроскопические методы исследования
Основными задачами микроскопии являются следующие:
• Выявление микроорганизмов в различных материалах.
• Ориентировочная идентификация микроорганизмов в исследуем
Морфология бактерий, структура и химический состав бактериальной клетки
Морфологические типы бактерий, в сравнении с высшими организмами, немногочисленны. Клетки большинства бактерий имеют сферическую, цилиндрическую или извитую форму, но существует небольшая группа ми
Эндоспоры бактерий
Спорообразование свойственно бактериям нескольких родов, к числу которых относятся Bacillus, Clostridium, Sporosarcina, Desufotomaculum, etc. Обычно внутри каждой клетки образуется одна спора, кото
Капсула бактерий
При определенных условиях культивирования многие виды бактерий различных таксономических групп образуют слизистое вещество, формирующее вокруг клетки структуру, которая называется капсулой. Колонии
Цитоплазматические включения
У многих бактерий, выращиваемых в определенных условиях, в результате обменных процессов в цитоплазме образуются отложения, которые называют включениями. Среди них – отложения жира, поли-β-гид
Подвижность бактерий
Поступательное движение бактерий за счет жгутиков можно наблюдать во влажных препаратах, применяя в большинстве случаев светлопольный микроскоп. Наиболее эффективно наблюдение за подвижностью в тем
Количественный учет микроорганизмов.
О росте микроорганизмов в естественных субстратах или питательных средах судят по количеству клеток в единице объема. Данная величина носит название титра клеток (или фаговых частиц). Выбор метода
Подсчет клеток на мембранных фильтрах
Этот метод используют для подсчета количества микроорганизмов в жидких материалах с низкой плотностью клеток. Метод основан на концентрировании клеток на поверхности фильтра в результате фильтрации
Определение количества микробных клеток нефелометрическим методом
Этот метод широко применяется в микробиологических исследованиях, так как позволяет достаточно точно и сравнительно быстро определить количество клеток в культуральной среде. В основе метода лежит
Микроскопия микроорганизмов в окрашенном виде
Для изучения микроорганизмов в окрашенном виде на предметном стекле делают мазок, высушивают, фиксируют его и после этого окрашивают. Приготовление мазков. Исследуемый материал распределяют тонким
V. Требования, предъявляемые к методам анализа.
1.Правильность – параметр, характеризующий близость экспериментальных и истинных значений измеряемой величины. Она характеризуется систематической погрешностью, которая зави
Отбор проб
Перед исследованием вещество предварительно подготавливают к анализу. Отбор средней пробы является одной из важнейших подготовительных операций. Его цель – получить относительно небольшое количеств
Отбор проб продуктов питания
По физическим свойствам продукты питания делятся на две основные группы: жидкие и твердые.
Последние по глубине проникновения ТХВ могут быть подразделены на плотные (хлеб, мясо, рыба и т.
Общие принципы подготовки проб к анализу
Пробы, поступающие в лабораторию, осматривают, вскрывают упаковку и регистрируют в журнале в соответствии с сопроводительной документацией, удостоверяющей объект. При этом в лабораторном журнале от
Физический метод анализа
Эти методы основаны на использовании зависимости физических свойств вещества от их химического состава. Наиболее распространены следующие физические методы анализа.
1. Спектраль
Физические свойства жира
Жир
Коэффициент
преломления
Плотность,
г/см³
Подсолнечное
масло
1,4748
0,91
Физико-химический метод анализа
Особенно велика их роль в экологическом мониторинге. Лишь современные методы анализа, как спектроскопические, электрохимические, хроматографические и другие (среди них отметим масс– спектрометрию),
Фотометрический метод анализа. Фотометрия
Фотометрический метод анализа (Фотометрия), совокупность методов абсорбционного спектрального анализа, основанных на избирательном поглощении электромагнитного излучения в видимой,
Методы определения рН
Для определения значения pH растворов широко используют несколько методик. Водородный показатель можно приблизительно оценивать с помощью индикаторов, точно измерять pH-метром или определять аналит
Техника приготовления растворов.
Независимо от того, какие (поточности) приготовляют растворы, применять следует только чистые растворители. Если растворителем служит вода, то можно применять только дистиллированную или деминерали
Расчеты при приготовлении водных растворов
Приблизительные растворы. При приготовлении приблизительных растворов количества веществ, которые должны быть взяты для этого, вычисляют с небольшой точностью. Атомные веса элемент
Растворы солей
Приблизительные растворы. Растворы солей готовят, как указано выше. Готовый раствор или отфильтровывают, или дают ему отстояться от нерастворимых в воде примесей,
Растворы щелочей
Приблизительные растворы. Наиболее употребительными растворами щелочей в лабораторной практике являются растворы едкого натра NaOH. Растворы едкого кали KOH готовят редко, растворы
Растворы кислот
Приблизительные растворы. В большинстве случаев в лаборатории приходится пользоваться соляной, серной и азотной кислотами. Кислоты имеются в продаже в виде концентрированных раство
Фиксаналы
Для быстрого приготовления точных растворов различных веществ (кислот, щелочей и солей) удобно применять фиксаналы. Это — заранее приготовленные и запаянные в стеклянных ампулах точно отвешенны
Индикаторы
Индикаторами называют вещества, применяемые при объемно-аналитических определениях и в некоторых других случаях для определения конца реакции.
Момент окончания реакции определяют или по из
Обесцвечивание растворов.
Растворы многих, преимущественно органических, веществ, приготовленные из технических препаратов, часто имеют окраску. Она вызывается присутствием в растворе примесей, главным образом смолистого ха
Новости и инфо для студентов