Количественное определение содержания витамина С – в твердых продуктах
Принцип метода: метод основан на способности витамина С восстанавливать 2,6- дихлорфенолиндофенол, который в кислой среде имеет красную окраску, а при восстановлении обесцвечивается. При этом аскорбиновая кислота переходит в дегидроаскорбиновую. Исследуемый раствор титруют в кислой среде щелочным раствором 2,6 дихлорфенолиндофенола (краска Тильманса) до появления розового окрашивания. Для определения содержания витамина С в твердых продуктах предварительно необходимо получить экстракт или вытяжку, содержащую витамин С.
Ход работы:
Навеску исследуемого продукта (1 г капусты, яблока, груши и т. п., или 5 г картофеля) растирают в ступке с 2 мл 10% раствора соляной кислоты, приливают 8 мл воды, перемешивают, оставляют на 5-10 минут для полного извлечения витамина. Затем содержимое фильтруют (кроме картофеля). Для титрования берут 2 мл фильтрата (картофельную кашицу титруют целиком), добавляют 10 капель 10% раствора НCI и титруют краской Тильманса до розового цвета, сохраняющегося в течение 30 сек. Результат титрования записывают и по формуле рассчитывают содержание витамина С в 100 г продукта. Концентрацию витамина С выражают в мг/дл.
Расчет производят по формуле:
Х = 0,088 х А х Г х 100
Б х В - мг/дл вит С
1 мл 0,001н. раствора краски Тильманса эквивалентен 0,088 мг витамина С
А-количество краски Тильманса, израсходованной на титрование;
Б- объем экстракта, взятый для титрования, мл;
В – количество продукта, взятое для анализа, г;
Г- общее количество экстракта, мл;
100 – пересчет содержания витамина С на 100 г продукта.
Результат:
Вывод:
Лабораторная работа N 2
Определение витамина С в моче
Определение витамина С в моче позволяет судить об обеспеченности организма этим витамином. Однако, при гиповитаминозе С содержание его в моче не всегда понижено и может быть нормальным. У здоровых людей введение 100 мг витамина С приводит к повышению его концентрации в крови и экскреции с мочой. При гиповитаминозе С ткани, испытывающие недостаток в витамине, задерживают принятый витамин С, и его экскреция не увеличивается. Моча здорового человека содержит 20-30 мг в суточном объеме.
Ход работы:
В стаканчик отмеривают 10 мл мочи и 10 мл воды, перемешивают, подкисляют 20 каплями 10% раствора НCI и титруют 0,001н раствором краски Тильманса до появления розовой окраски. Результат титрования записывают и по формуле производят расчет, выражая экскрецию витамина С в мг/сутки.
0,088 х А х В
Б = мг/сутки
А- мл краски Тильманса, пошедшей на титрование;
Б- объем мочи, взятый для титрования, мл;
В – среднее суточное количество мочи, (1500 мл у мужчин, 1200 мл – у женщин).
Результат:
Вывод:
ПРИЛОЖЕНИЕ
Для диагностики гиповитаминоза С, проводят определение витамина С в моче. Наблюдается соответствие между концентрацией витамина С в крови и количеством этого витамина, выделяемого с мочой. Однако, при гиповитаминозе содержание аскорбиновой кислоты не всегда понижено. Часто оно бывает нормальным, несмотря на большой недостаток этого витамина в тканях и органах. У здоровых людей введение per os 100 мг витамина С быстро приводит к повышению его концентрации в крови и моче. При гиповитаминозе С ткани, испытывающие недостаток, задерживают витамин и его концентрация в моче не повышается. Моча здорового человека содержит 20 – 30 мг витамина С.
Решить следующие ситуационные задачи:
1. Врач предполагает наличие гиповитаминоза С у больного. Как можно провести биохимическую диагностику гиповитаминоза С ? (ответ: по экскреции витамина С в моче)
2. Больному ревматизмом показано лечение кортикостероидными гормонами. Но врач, опасаясь развития гипофункции коры надпочечников, лечение кортикостероидами не назначил, а рекомендовал больному принимать большие терапевтические дозы аскорбиновой кислоты. Правильно ли поступил врач? Ответ: так как витамин С принимает участие в гидроксилировании пролина и лизина при созревании коллагена (основной белок соединительной ткани при поражении ревматоидным артритом), то действия врача оправданы.
3. Что лежит в основе действия аcкорбиновой кислоты, рекомендованной для лечения повышенной проницаемости капилляров у больного суставным ревматизмом? (см ответ на предыдущую задачу)
Вопросы для студентов
1. Какие пищевые продукты наиболее богаты витамином С?
2. Какова экскреция витамина С с мочой?
3. Какие химические свойства аскорбиновой кислоты обусловливают ее активное участие в метаболических процессах?
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ: по теме «Витамины» заполняется таблица.
| Название | Водо– или жиро-растворимые | Источники | Участие в биохимических реакциях: - кофермент; - фермент; катализируемая реакция | Симптомы недостаточности или гипервитаминоза | Анти ви тамины |
Заполнить в таблицу:
В1, В2, В6, РР, С, пантотеновая кислота, фолиевая кислота, В12, биотин, А, Д, Е, К.
Витаминоподобные соединения: биофлавоноиды (витамин Р), инозит, карнитин, липоевая кислота, оротовая кислота, пангамовая кислота, парааминобензойная кислота, S-метилметионинсульфоний (витамин U), холин.
Практические навыки, которыми должен овладеть студентуметь оценивать обеспечение организма витамином С и его значение в метаболических процессах