На поверхность плотной питательной среды, засеянной сплошным газоном исследуемой культурой, накладывают не более 6 дисков, пропитанных антибиотиками, на расстоянии не менее 2 см друг от друга. Регистрация результатов проводится через 18-24 часов инкубирования в термостате по диаметру зоны отсутствия роста вокруг дисков с антибиотиками. Наличие роста вокруг диска свидетельствует о нечувствительности данного микроба к антибиотику. Для интерпретации результатов используются специальные таблицы.
Рисунок 1. Определение чувствительности
микроорганизмов диско-диффузионным методом:
1 – микроорганизм чувствителен к антибиотику;
2 – микроорганизм умеренно резистентен к антибиотику;
3 – микроорганизм устойчивк антибиотику.
Метод Е-тестовПринцип метода. Определение чувствительности микроорганизма проводится аналогично тестированию диско-диффузионным методом. Отличие состоит в том, что вместо диска с антибиотиком используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной. В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК).
Рисунок 2. Определение чувствительности микроорганизмов с помощью Е-тестов
Метод серийных разведений в бульонной средеБерут 9 пробирок, содержащих 1 мл бульона Мюллер-Хинтона. Одна из них служит контролем роста бактерий, а в остальных готовят двукратные серийные разведения антибактериального препарата. Например, 32 мг/л – 1-я, 16 мг/л – 2-я, 8 мг/л – 3-я, 4 мг/л – 4-я и т.д. Затем в каждую пробирку вносят 0,1 мл испытуемой бактериальной суспензии. Посевы инкубируют при 37°С в течение 18-24 ч., отсутствие помутнения среды свидетельствует о задержке роста бактерий в присутствии данной концентрации препарата.
Рисунок 3. Определение значения МПК методом разведения в жидкой питательной среде
Минимальная подавляющая концентрация (МПК) – наименьшая концентрация антибиотика (в мкг/мл или мг/л), которая in vitro полностью подавляет видимый рост бактерий.
2► Определение чувствительности разных штаммов стафилококков к антибиотикам методом стандартных дисков
Антибиотик | Зона подавления роста, мм | Характеристика штамма |
1. Оксациллин | ||
2. Ко-тримоксазол | ||
3. Рифампицин | ||
4. Эритромицин | ||
5. Ванкомицин | ||
6. Ципрофлоксацин |
Исследуемая культура является чувствительной (S), умеренно устойчивой к (I), устойчивой (R) _.
Достоинства метода: Легко воспроизводимый метод Недостатки метода: качественный метод, не позволяет определить МПК препарата./
3►Определение минимальной подавляющей концентрации (МПК) пенициллина методом серийных разведений.
Вывод: МПК пенициллина для исследуемого штамма составляет (см . рисунок № 3) 4 мг/мл
Достоинства метода: количественный , позволяет определить МПК препарата
Недостатки метода: трудновоспроизводимый метод
4►Выявление и регистрация антагонистического действия разных видов бактерий.
На чашку с МПА штрихом по диаметру засевается микроб-антагонист и перпендикулярно к нему тест-штаммы. Учет результатов проводится через сутки после посева. Наличие и степень антагонистического действия определяют по величине зон задержки роста тест-культур.
Штриховой посев Васillus polymyxa
Вывод:наибольшее антагонистическое действие выявлено к тест-штаммам (укажите виды)
P.aeruginosae, E.coli, нет антагонизма к S. aureus