Разметить хроматографическую пластинку, как показано на рис. 1. В точки 1, 2, 3 наносят капилляром растворы аминокислот, в точку 3 – раствор смеси аминокислот. Хроматограмму подсушивают над теплой плиткой.
Для проявления хроматограмму помещают в хроматографический сосуд, на дно которого налита смесь бутанола, уксусной кислоты и воды (15:3:7) так, чтобы растворитель не доходил до линии старта. Сосуд закрывают крышкой и оставляют хроматограмму на время, за которое проявитель пройдет путь снизу вверх. Хроматограмму вынимают из сосуда, отмечают границу фронта проявителя и высушивают. На высушенную хроматограмму наносят в спрей-камере при помощи пульверизатора 0,5%-ный раствор нингидрина в ацетоне. Когда ацетон испарится, хроматограмму помещают на термостолик при 70°С на 15 мин. Позиции аминокислот на хроматограмме выявляются в виде фиолетовых пятен.
Рассчитывают Rf (коэффициенты распределения) по формуле:
Rf = Хi / Х0,
где Х0 – расстояние от линии старта до линии форонта растворителя, Хi- расстояние от линии старта до середины пятна (рис. 1).
Сопоставляя величины Rf аминокислот-свидетелей и аминокислот исследуемой смеси, делают заключение о природе аминокислот в составе смеси.
| Рис. 1. Хроматограмма |