Моча и сыворотка крови здоровых людей обладают низкой амилазной активностью по сравнению с амилазой слюны. Определение активности амилазы в моче и сыворотке крови используется в клинической практике при диагностике заболеваний поджелудочной железы. При остром панкреатите активность фермента в крови и в моче увеличивается в 10-30 раз, при хроническом панкреатите, раке поджелудочной железы, приступе желчнокаменной болезни – в 3-5 раз. При нарушении функции почек, а также при некоторых заболеваниях крови повышенная активность фермента в крови не сопровождается увеличением его активности в моче.
Фермент амилаза катализирует гидролиз α-1,4-гликозидной связи крахмала и гликогена. Метод основан на колориметрическом определении концентрации крахмала до и после ферментативного гидролиза по окрашиванию в реакции с реактивом Люголя. Работу проводят согласно таблице 2:
Таблица 2. Определение активности амилазы.
| Реактивы | Количество реактива, мл | |
| опыт | контроль | |
| Раствор крахмала | 1,0 | 1,0 |
| Сыворотка крови | 0,02 | - |
| Инкубировать при 370 5 минут | ||
| Реактив Люголя | 1,0 | 1,0 |
| Дистиллированная вода | 8,0 | 8,0 |
| Сыворотка крови | - | 0,02 |
Оба раствора фотометрируют на фотоэлектроколориметре при 630 нм (толщина кюветы 10 мм) относительно воды. Расчет активности амилазы проводят по формуле:
((Dк – Dоп)/Dк)×200,
где Dк – оптическая плотность контрольной пробы, Dоп – опытной пробы.