Задача работы:изучить особенности процесса высаливания белка.
Оборудование, материалы:яичный белок, насыщенный раствор сульфата аммония, спирт, 10%-й раствор щелочи, 1%-й раствор сульфата меди, фильтры, пипетки, пробирки.
Выполнение работы:
а) Осаждение белков сульфатом аммония.
1. К 15 каплям раствора белка добавляют 15 капель насыщенного раствора сульфата аммония и перемешивают. Получается полунасыщенный раствор сульфата аммония, в котором выпадает осадок глобулинов (небольшое количество белых хлопьев).
2. Через 5 минут отфильтровывают содержимое пробирки. В фильтрате остаются альбумины.
3. К фильтрату добавляют тонкоизмельченный порошок сульфата аммония до полного насыщения, т.е. до тех пор, пока новая порция порошка останется нерастворенной. Выпадает осадок яичного альбумина.
4. Альбумин отфильтровывают.
5. Проверяют фильтрат на отсутствие белка с помощью биуретовой реакции: к 1 мл исследуемого фильтрата приливают 1 мл 10% раствора гидроксида натрия и 3-5 капель 1% раствора сульфата меди и перемешивают. Фиолетовое окрашивание должно отсутствовать. Содержимое пробирки при наличии белка приобретает фиолетовый цвет в результате образования комплексного соединения.
O O O O
NH2-CH- C- NH-CH -C- NH-CH -C- NH-CH -C- NH - - - - CH-СООН
| | | | | + Cu(OH)2
R1 R2 R3 R4 Rn
Cu
O O OH O
NH2-CH- C= N -CH –C= N -CH –C= N -CH -C- NH - - - - CH-СООН
| | | | |
R1 R2 R3 R4 Rn