Культивирование пикорнавирусов на примере получения полиовируса типа. В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК HeLa. В качестве конкретной методики культивирования вирусов можно привести способ выращивания полиовируса в перевиваемых клетках.
Все процедуры проводятся в стерильных условиях. 1. Определенные сублинии клеток HeLa например, HeLa S3 могут расти в средах с низкой концентрацией ионов кальция например, CaS2MEM. Для эффективного заражения существенно, чтобы клетки хорошо росли в виде однородной суспензии.
Клетки осаждают низкоскоростным центрифугированием 15 мин при 900 g и ресуспендируют в среде CaS2MEM до концентрации 2.107 клмл 120 исходного объема. 2. К клеточной суспензии добавляют вирус в концентрации 10 50 БОЕ на клетку инкубируют ее на магнитной мешалке в течение 1 ч при 35 С. 3. Суспензию разводят той же средой до концентрации 2.106 клмл и добавляют 100 мкКи 3Н-уридина. 4. Клеточную суспензию инкубируют в течение 8 ч, после чего осаждают клетки низкоскоростным центрифугированием 15 мин при 900 g и промывают один раз фосфатным буферным раствором PBS, не содержащим ионов магния и кальция. 5. Клетки ресуспендируют в PBS 5-107клмл и проводят три цикла замораживания оттаивания. 6. Остатки клеток удаляют центрифугированием. 7. Супернатант сохраняют для дальнейшей очистки.