Инкубация Agrobacterium tumefaciens с экссудатами тканей растений

Инкубация Agrobacterium tumefaciens с экссудатами тканей растений. Ночную культуру A. tumefaciens С58С1 pGV3850, выращенную на ротационном шейкере 20 цикловмин при 290 С в жидкой среде LB, собирали центрифугированием и суспензировали в среде МС 0,1 М фосфатном буфере рН 5,5 до кислотности А600 0,05. После 5 часов роста в бактериальную культуру добавляли мелконарезанные стерильные ткани растений листья, стебли в количестве 2 г на 10 мл среды и продолжали инкубацию в течение 48 часов.

В качетве положительного контроля использовали агробактериальную культуру с добавлением в качестве индуктора 100 мкМ ацетосирингона.

В качестве отрицательного контроля использовали агробактериальные клетки, выращенные на среде без ацетосирингона и эксцудатов растений.

Эффективность индукции процессинга тДНК церез 48 часов инкубации агробактерий с тканями растений.

Титр жизнеспособных бактерий после инкубации с эксцудатами растений проверяли путем их высева в различных разведениях на чашки Петри с агаризованной средой LB. Каждый вариант опытов проводили в трех повторностях. 2.2.2.