рефераты конспекты курсовые дипломные лекции шпоры

Реферат Курсовая Конспект

ПРИНЦИПЫ ТЕХНОЛОГИЙ РЕКОМБИНАНТНЫХ ДНК

ПРИНЦИПЫ ТЕХНОЛОГИЙ РЕКОМБИНАНТНЫХ ДНК - раздел Биология, Генная инженерия Принципы Технологий Рекомбинантных Днк. Было Выделено Много Рестриктазболее 1...

ПРИНЦИПЫ ТЕХНОЛОГИЙ РЕКОМБИНАНТНЫХ ДНК. Было выделено много рестриктазболее 150,расщепляющих ДНК в специфических сайтах. Например эндонуклеаза R1 регистрирует двухцепочную ДНК по двум сайтам таким образом, что образуются два липких конца G-A-A-T-T-C C-T-T-A-A-G Липкие концы различных молекул ДНК, расщеплнных этим ферментом, могут вступать по четырм A-T-парам.

Рестриктационные эндонуклеазы различаются по тем сайтам ДНК, которые они распознают и разрезают. Их можно использовать для различных целей. Однако наиболее распространенным этапом является их применение для амплификации специфической определения нуклеотидных последовательностей фрагментов ДНК, необходимо для ДНК или для изучения механизмов экспрессии генов.

Последняя проблема наиболее важна в практическом аспекте гены контролирующие образование функционально активных белков, теперьможно вводить в бактерии и размножатьамплифицировать.эта процедура называется клонированием генов. Благодаря ей, появилась возможность вырабатывать в больших количествах белки, которые раньше удавалось получить ничтожно мало. Эта технология основана на следующем принцепе помимо своей собственной кольцевой хромосомы, бактерии часто содержат дополнительные маленькие кольцевидные молекулы двух цепочной ДНК,называемые плазмидами.

Плазмиды реплицируются автономо и сами могут содержать гены, определяющие устойчивость бактерий к антибиотикам или контролирующие синтез веществ, например колицинов, убивающих другие бактериисм. рис.1. Плазмидную ДНК можно выделить и ращепить подходящей рестриктазой только в одном сайте, превратив кольцевую молекулу в линейную с липкими концами. Фрагменты любой чужеродной ДНК с такими же липкими концамиполученными после разрезания аналогичной рестриктазой можно сшить с плазмидой ДНК с помощью лигазы.

Рис. 1. Клетка E-coli с хромосомой и плазмидой. Рекомбинантную конструкцию вводят затем в бактерию, где она реплицируется см. рис.2 Рис. 2. Принцип введения чужеродной ДНК в бактериальную плазмиду с использованием эндонуклеазы. Источник экзогенной ДНК не имеет значения. ДНК может быть получена, например, из клеток человека, но можно сшивать и искуственно синтизированные гены. Кроме бактериальных плазмид в качестве векторов носителей ДНК используют фаги объект исследования Альберта.

Часть генома этого фага не обязательна для его размножения в бактерии. Вместо него можно ввести чужеродную ДНК, которая будет размножаться вместе с фаговой, после инфицирования бактерий. Добиться репликации и амплификации в составе плазмидной или фаговой ДНК после трансформации бактериальной клетки ещ не значит решить все е проблемы. Прежде всего возникают два вопроса 1. Как распознавать клоны, содержащие гибридную ДНК, среди потомства трансформированных клеток или живых бактериофагов 1. как идентифицировать необходимые фрагменты ДНК среди многих кл онированных неизвестных фрагментов Например можно отбирать бактериальные клетки, если они несут плазмиду с фактором устойчивости к антибиотику, выращивая их на среде, на среде, содержащей антибиотик.

Нетрансформированные клетки без плазмиди, следовательно, без гена устойчивости к антибиотику просто не будут расти на такой среде. В последнее время разработано много специальных методов вакцинации, которые позволяют отбирать только рекомбинантные клетки.

Для генной инженерии белков недостаточно отобрать и размножить определнные фрагменты ДНК, необходимо ещ индуцировать их экспрессию в клетке. Для этого необходимо подключить рекомбинантную молекулу ДНК , последующую трансляцию матричной РНК и процессинг как на транскрипционном, так и на трансляционных уровнях. 1.4. ИДЕНТИФИКАЦИЯ И АНАЛИЗ ГЕНОВ. Ещ одна область применения рестриктаз идентификация и определение числа генов.

Эти задачи решаются с помощью метода разработанного Саузерном. Тотальную ДНК из клеток человека гидролизуют эндонуклеазой примерно на 50 фрагментов длиной от 102 до 105 нуклеотидных пар. Затем фрагменты разделяют по молекулярной массе с помощью гель- электрофореза в ага розе, после чего ДНК денатурирует с щелочью прямо в геле, чтобы получить одноцепочные фрагменты. Их переносят на нитроцеллюлозный фильтр и фиксируют высушиванием при 800С. В результате получается отпечатокреплика картины разделения фрагментов ДНК по их размеру.

Эти фрагменты можно идентифицировать методом гибридизации с радиоактивными ДНК-зондами, специфичными для определнных генов или хромосом. Любой фрагмент, содержащий всю последовательность зондируемого гена или его часть, будет выглядеть на радиоавтографе в виде тмной полосы. Зонды и генные библиотеки. Главное условие такого анализа - наличие подходящего геноспецифического радиоактивного ДНК-зонда, который можно использовать для гибридизации. 1.5.

– Конец работы –

Эта тема принадлежит разделу:

Генная инженерия

В основе генной инженерии лежит обусловленная последними достижениями молекулярной биологии и генетики возможность целенаправленного манипулирования… К этим достижениям следует отнести установление универсальности генетического… Таким образом, изменение наследственных свойств организма с помощью генной инженерии сводится к конструированию из…

Если Вам нужно дополнительный материал на эту тему, или Вы не нашли то, что искали, рекомендуем воспользоваться поиском по нашей базе работ: ПРИНЦИПЫ ТЕХНОЛОГИЙ РЕКОМБИНАНТНЫХ ДНК

Что будем делать с полученным материалом:

Если этот материал оказался полезным ля Вас, Вы можете сохранить его на свою страничку в социальных сетях:

Все темы данного раздела:

Открытие двойной структуры ДНК и матричного синтеза
Открытие двойной структуры ДНК и матричного синтеза. Начальные работы американских учных Уотсона и Крика были произведены в 1953 году. Они дали возможность развиваться генной инженерии в качестве с

ГИБРИДИЗАЦИЯ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ
ГИБРИДИЗАЦИЯ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ. Способность к гибридизации цепей ДНК лежит в основе многих методических примов молекулярной биологии, поэтому более подробное описание принципа гибридизации будет п

СОРТИРОВКА ХРОМОСОМ
СОРТИРОВКА ХРОМОСОМ. Следующий метод это метод сортировки хромосом при опмощи цитофлюрометрии. Этот метод может быть использован в двух разных целях 1 Для идентификации и количественного ана

ДИНАМИЧНОСТЬ ГЕНОМА
ДИНАМИЧНОСТЬ ГЕНОМА. Методы новой гентики расширили наши знания о структуре генетического материала. В 1963 году Тэйлор описал индуцированные фагом мутации E. Coli, вкоре после этого, Старли

ВОЗМОЖНОСТИ ГЕННОЙ ИНЖЕНЕРИИ
ВОЗМОЖНОСТИ ГЕННОЙ ИНЖЕНЕРИИ. Значительный прогресс достигнут в практической области создания новых продуктов для медицинской промышленности и лечения болезней человека табл.2. ТАБЛИЦА 2. Использов

ЧТО БУДЕТ СДЕЛАННО ПОСЛЕ ЗАВЕРШЕНИЯ АНАЛИЗА ГЕНОМА ЧЕЛОВЕКА
ЧТО БУДЕТ СДЕЛАННО ПОСЛЕ ЗАВЕРШЕНИЯ АНАЛИЗА ГЕНОМА ЧЕЛОВЕКА. Главная стратегическая задача будущего сформулирована следующим образом изучить однонуклеотидные вариации ДНК в разных органах и клетках

Создание трансгенных растений
Создание трансгенных растений. Еще 10 лет тому назад биотехнология растений заметно отставала в своем развитии, но за последние 3 года наблюдается быстрый выброс на рынок трансгенных растений с нов

Актуальность разработки новых вакцин
Актуальность разработки новых вакцин. Вакцины одно из самых значительных достижений медицины, их использование к тому же чрезвычайно эффективно с экономической точки зрения. В последние годы

Разработка ДНК-вакцин
Разработка ДНК-вакцин. Используемые сегодня вакцины можно разделить в зависимости от методов их получения на следующие типы живые аттенуированные вакцины инактивированные вакцины вакцины, содержащи

Хотите получать на электронную почту самые свежие новости?
Education Insider Sample
Подпишитесь на Нашу рассылку
Наша политика приватности обеспечивает 100% безопасность и анонимность Ваших E-Mail
Реклама
Соответствующий теме материал
  • Похожее
  • Популярное
  • Облако тегов
  • Здесь
  • Временно
  • Пусто
Теги