СОРТИРОВКА ХРОМОСОМ. Следующий метод это метод сортировки хромосом при опмощи цитофлюрометрии.
Этот метод может быть использован в двух разных целях 1 Для идентификации и количественного анализа большого числа хромосом в течение очень короткого времени. 2 для препаративного разделения хромосом. Этот метод имеет два преимущества перед стандартными методами анализа хромосом во-первых, он полностью автоматический, благодаря чему исключается элемент субъективности во-вторых, он намного быстрее рис.3 Однако важнее, что этот метод позволяет препаративно разделять хромосомы, и при наличии специфических зондов исследовать структуру и функцию отдельных генов становится относительно просто.
В этом случае ген можно локализовать в хромосоме с помощью гибридизации in situ, размножить его ДНК путм клонирования и секвенирования. Рис. 3. Принцип сортировки хромосом с помощью лазера. Хромосомы окрашены флуоресцирующим красителем. Флуоресценция возбуждается лазерным лучом и измеряется для каждой хромосомы отдельно.
Данные измерений используют для сортировки хромосом. 1.7. СЕКВЕНИРОВАНИЕ ДНК. Последовательность нуклеотидов и генетический код. Методы определнной последовательности аминокислот в полипептидной цепи были известны ещ в 50-х годах. Теоретически это относительно лгкая проблема, поскольку все 20 аминокислот, встречающихся в природных белках, имеют разные свойства. С другой стороны, нуклеотидная последовательность ДНК относительно однородна по составу однородных звеньев, так как содержит только четыре типа азотистых оснований гуанин, цитозин, аденин и тимин.
Когда в 60-е годы был расшифрован генетический код, появилась возможность востанавливать дедуцировать нуклеотидную последовательность соответствующего белка. Однако генетический код является вырожденным, то есть одной и той же аминокислоте соответствуют несколько нуклеотидных триплетов. Следовательно сведения о нуклеотидной последовательности аминокислот в белке, не однозначны.
Кроме того последовательности аминокислот не содержат никакой информации о последовательности некодирующих участков ДНК. Принцип состоит в следующем длинную молекулу ДНК фрагментируют при помощи агентов, расщепляющихся в специфических сайтах. Затем определяют последовательность нуклеотидов в каждом из этих фрагментов. Очердность фрагментов в целой молекуле восстанавливают, используя перекрывающие концы идентичные цепи разрезают повторно другой рестриктазой, а затем последовательности, перекрывающихся образующихся при обработке двумя рестриктазами разной специфичности, сравнивают.
Так может быть реконструирована полная последовательность. В пределах отдельных фрагментов порядок нуклеотидов определяют с помощью специальных методов. Раньше секвенирование ДНК было весьма трудным делом, теперь же оно осуществляется очень легко и быстро. Для этого необходимо длинную молекулу ДНК с помощью рестриктазы разделить на фрагменты удобного размера, а затем, если нужно, мощью специальных методов.
Раньше секвенирование ДНК было весьма трудным делом, теперь же оно осуществляется очень легко и быстро. Для этого необходимо длинную молекулу ДНК с помощью рестриктазы разделить на фрагменты удобного размера, а затем, если нужно, ные сведения и о нетранскрибирусных участках ДНК, важных для контроля транскрипциитак называемые операторы и промоторы. 1.8.