IV. Результаты и их обсуждение

В данном разделе изложены предположения о причинах изменений содержания липидов и их фракций в печени и мышцах, экспериментально выявленных в ходе инкубации тканей в различных условиях.

На табл. №№ 1-16 представлены результаты анализа липидного состава мышц и печени лягушек, а также содержание липидов в препаратах этих тканей, инкубированных в различных условиях в течение 1 часа и 24 часов – в бескислородной и в насыщенной кислородом среде (печень и мышцы), а также результаты анализа липидного состава мышечной ткани, экспонированной in situ после забоя лягушек.

Эксперимент №1

Таблица 1

Содержание липидных фракций мышечной ткани в различных условиях (бескислородная среда, насыщенная кислородом среда, неизолированная ткань)

в % от суммы фракций	Условия/фракции	м(0)	м(1)О₂	м(1)к	м(24)О₂	м(24)к	Т(1)	Т(24)
ФЛ	21,17	14,93	18,66	19,34	19,33	14,47	13,99
Х	18,00	18,71	15,78	18,97	12,64	16,55	15,80
СЖК	17,34	21,84	20,55	27,49	19,05	23,99	26,79
ТГ	25,16	19,38	18,89	19,25	16,68	19,76	17,72
ЭХ	18,33	25,13	26,12	14,95	32,30	25,22	25,69

Таблица 2

Содержание липидных фракций печени в различных условиях (бескислородная среда, насыщенная кислородом среда)

	Условия/фракции	п(0)	п(1)О₂	п(1)к	п(24)О₂	п(24)к
в % от суммы фракций	ФЛ	24,40	25,09	24,85	29,61	29,25
Х	14,24	13,72	13,54	16,44	16,18
СЖК	22,43	24,03	23,70	28,77	28,30
ТГ	23,21	21,69	22,63	25,18	26,27
ЭХ	15,71	15,47	15,27	15,06	15,44

Таблица 3

Содержание общих липидов мышечной ткани в различных условиях (бескислородная среда, насыщенная кислородом среда, неизолированная ткань)

ОЛ (мг%)	0ч.	1ч.	24ч.
Т	1680,60	1307,13	1419,17
м (О₂)	1344,48	1643,25
м (К)	1587,23	1643,25

Таблица 4

Содержание общих липидов печени в различных условиях (бескислородная среда, насыщенная кислородом среда)

ОЛ (мг%)	0ч.	1ч.	24ч.
п(О₂)	2950,39	2651,61	2502,23
п(к)	2651,61	2614,27

Примечание:

м – тканевый образец мышц, п – тканевый образец печени, Т – экспозиция неизолированной ткани, к – бескислородная среда, О₂ – насыщенная кислородом среда

Эксперимент №2

Таблица 5

	условия/фракции	м(0)	м(1)О₂	м(1)к	м(24)О₂	м(24)к	Т(1)	Т(24)
в % от суммы фракций	ФЛ	24,30	20,85	19,06	19,49	19,75	18,38	16,25
Х	15,23	15,15	15,57	16,73	15,33	16,82	16,82
СЖК	16,59	20,33	22,30	24,24	26,00	24,38	28,52
ТГ	24,90	22,78	22,45	21,97	20,23	20,09	18,87
ЭХ	18,99	20,89	20,62	17,58	18,70	20,33	19,54
	условия/фракции	п(0)	п(1)О₂	п(1)к	п(24)О₂	п(24)к
в % от суммы фракций	ФЛ	16,28	13,66	13,08	12,72	12,73
Х	21,60	23,92	24,47	25,61	25,07
СЖК	21,11	21,59	22,36	21,92	22,75
ТГ	16,10	15,40	15,09	15,44	15,10
ЭХ	24,90	25,43	25,01	24,32	24,35

Таблица 7

ОЛ (мг%)	0ч.	1ч.	24ч.
Т	1527,19	1349,61	1349,61
О₂	1349,61	1669,25

Таблица 8

Содержание общих липидов печени в различных условиях (бескислородная среда, насыщенная кислородом среда)

ОЛ(мг%)	0ч.	1ч.	24ч.
О₂	2770,24	2415,08	2379,57
К	2521,63	2415,08

Примечание:

м – тканевый образец мышц

п – тканевый образец печени

Т – экспозиция неизолированной ткани

к – бескислородная среда

О₂ – насыщенная кислородом среда

Эксперимент №3

Таблица 9

	условия/фракции	м(0)	м(1)О₂	м(1)к	м(24)О₂	м(24)к	Т(1)	Т(24)
в % от суммы фракций	ФЛ	19,88	14,89	20,26	18,60	22,91	14,99	14,66
Х	16,90	19,47	17,14	18,24	17,34	17,15	16,56
СЖК	18,61	21,78	22,31	26,43	22,58	24,85	28,08
ТГ	25,25	22,37	20,51	18,51	19,77	20,48	18,57
ЭХ	19,36	21,48	19,77	18,21	17,40	22,53	22,12

Таблица 10

Содержание липидных фракций печени в различных условиях (бескислородная среда, насыщенная кислородом среда)

	Условия/фракции	п(0)	п(1)О2	п(1)к	п(24)О2	п(24)к
в % от суммы фракций	ФЛ	24,95	25,09	25,31	25,07	25,09
Х	15,10	13,72	13,48	13,91	13,56
СЖК	21,62	24,03	24,14	24,35	24,28
ТГ	22,34	21,69	21,51	21,32	21,75
ЭХ	15,99	15,47	15,55	15,35	15,31

Таблица 11

ОЛ (мг%)	0ч.	1ч.	24ч.
Т	1738,86	1267,92	1449,05
О2	1557,73	1485,28
К	1648,29	1557,73

Таблица 12

Содержание общих липидов печени в различных условиях (бескислородная среда, насыщенная кислородом среда)

ОЛ (мг%)	0ч.	1ч.	24ч.
О2	2572,06	2427,16	2246,03
К	2499,61	2390,93

Примечание:

м – тканевый образец мышц

п – тканевый образец печени

Т – экспозиция неизолированной ткани

к – бескислородная среда

О₂ – насыщенная кислородом среда

Эксперимент №4

Таблица 13

	условия/фракции	м(0)	м(1)О₂	м(1)к	м(24)О2	м(24)к	Т(1)	Т(24)
в % от суммы фракций	ФЛ	21,17	14,93	18,66	19,34	19,33	14,47	13,99
Х	18,00	18,71	15,78	18,97	12,64	16,55	15,80
СЖК	17,34	21,84	20,55	27,49	19,05	23,99	26,79
ТГ	25,16	19,38	18,89	19,25	16,68	19,76	17,72
ЭХ	18,33	25,13	26,12	14,95	32,30	25,22	25,69

Таблица 14

ОЛ (мг%)	0 ч.	1 ч.	24 ч.
Т	1614,04	1255,37	1362,97
О2	1398,84	1578,17
К	1524,37	1578,17

Примечание:

м – тканевый образец мышц

п – тканевый образец печени

Т – экспозиция неизолированной ткани

к – бескислородная среда

О₂ – насыщенная кислородом среда

Эксперимент №5

Таблица 15

Содержание липидных фракций мышечной ткани в различных условиях

(бескислородная среда, насыщенная кислородом среда, неизолированная ткань)

	условия/фракции	м(0)	м(1)О₂	м(1)к	м(24)О₂	м(24)к	Т(1)	Т(24)
в % от суммы фракций	ФЛ	24,56	20,80	20,24	19,84	19,93	20,04	18,30
Х	16,70	17,38	16,35	17,84	16,51	17,73	17,09
СЖК	18,39	22,99	22,30	26,13	26,44	23,46	27,54
ТГ	23,35	17,99	20,49	18,30	21,78	18,36	18,21
ЭХ	17,01	20,84	20,62	17,89	15,34	20,41	18,86

Таблица 16

ОЛ (мг%)	0 ч.	1 ч.	24 ч.
Т	1630,18	1267,92	1376,60
О₂	1412,82	1593,96
К	1539,62	1593,96

Примечание:

По результатам отдельных экспериментов рассчитаны средние значения и отклонения от среднего, проведено сравнение средних показателей – с начальным состоянием ткани (до инкубации или экспозиции), между препаратами с одинаковыми сроками инкубации, но в среде с различным содержанием кислорода, и между инкубированными и экспонированными препаратами.

Таблица 17

Изменение содержания липидных фракций мышечной ткани в различных условиях (бескислородная среда, насыщенная кислородом среда, неизолированная ткань)

	условия/фракции	м (0ч.)	м(1ч.) О₂	м (1ч.) к	м(24ч)О₂	м (24ч) к	Т (1ч.)	Т (24ч)
в % от суммы фракций	ФЛ	22,22±2,09	17,28±3,24	19,37±0,82	19,33±0,45	20,25±1,51°	16,47±2,58	15,44±1,85*
Х	16,96±1,14	17,88±1,71	16,13±0,64	18,15±0,93	14,89±2,18	16,96±0,49	16,42±0,59
СЖК	17,66±0,83	21,76±0,94*■	21,60±0,96*	26,35±1,33*	22,62±3,59*	24,13±0,52*	27,55±0,77*
ТГ	24,76±0,80	20,38±2,09	20,25±1,47*	19,46±1,47*	19,03±2,27*	19,69±0,80*	18,22±0,51*
ЭХ	18,40±0,90	22,70±2,24	22,65±3,19	16,72±1,63	23,20±8,39	22,74±2,43	22,38±3,26

Рис. 1. Влияние различных условий инкубации на состав липидных фракций мышечной ткани.

Примечание: различия достоверны по сравнению (р<0,05) :*- с 0 ч., • - со средой, насыщенной кислородом м (1ч.)О₂, °- с in situ(24ч.), ■ – с in situ (1 ч.).

Таблица 18

Изменение содержания липидных фракций печени в различных условиях (бескислородная среда, насыщенная кислородом среда)

		п (0ч.)	п (1ч.) О₂	п (1ч.) к	п (24ч.) О₂	п (24ч.) к
в % от суммы фракций	ФЛ	25,11±0,76	25,21 ±0,20	25,06 ±0,23	26,33 ±2,87	26,23 ±2,64
Х	15,10±0,86	13,70 ±0,04	13,37 ±0,25	14,36 ±1,90	14,16 ±1,80
СЖК	21,96±0,42	23,99 ±0,06٭	24,10 ±0,39٭	26,24 ±2,28٭	25,88 ±2,13٭
ТГ	22,22±0,86	21,66±0,06	22,17±0,58	22,81±2,08	23,59±2,38
ЭХ	15,62±0,66	15,45±0,04	15,30±0,24	10,26±8,89	10,14±8,78

Рис. 2.Влияние различных условий инкубации на состав липидных фракций печени

Примечание: различия достоверны по сравнению (р<0,05) :*- с 0 ч.

Таблица 19

Изменение содержания общих липидов мышечной ткани в различных условиях (бескислородная среда, насыщенная кислородом среда, неизолированная ткань)

ОЛ (мг%)

0 ч.

1 ч.

24 ч.

1638,17±78,90

1289,59±38,80*

1376,99±26,11*

О₂

1412,69±86,40

1593,98±70,99

1568,89±50,13

1580,06±43,26■

Примечание:

м – тканевый образец мышц, п – тканевый образец печени, Т – экспозиция неизолированной ткани, к – бескислородная среда, О₂ – насыщенная кислородом среда;

различия достоверны по сравнению (р<0,05) :*- с 0 ч., ■ – с in situ (24ч.)

Рис. 3. Влияние различных условий инкубации на состав общих липидов мышечной ткани

Таблица 20

Изменение содержания общих липидов печени в различных условиях (бескислородная среда, насыщенная кислородом среда)

ОЛ (мг%)	0 ч.	1 ч.	24 ч.
О₂	2781,56±158,35	2497,95±133,21	2375,94±128,14٭
К	2557,62±82,14	2473,43±122,57

Примечание:

различия достоверны по сравнению (р<0,05) :*- с 0 ч.

Рис. 4. Влияние различных условий инкубации на состав общих липидов печени

Как показали исследования, содержание ОЛ в печени лягушки составило в среднем 2782 мг%, но в ходе инкубации снижалось на 7-10% от начальной величины (таблица 20). Более выраженное в среднем снижение уровня ОЛ отмечено в образцах печени, инкубированных в среде, насыщенной кислородом, но данное отличие от бескислородных изначально условий не достигло статистически достоверных величин. Однако тенденция к снижению уровня ОЛ в препаратах, инкубированных в течение суток в насыщенной кислородом среде, по сравнению с начальным уровнем подтверждается статистически, тогда как для препаратов после суточной инкубации в изначально бескислородной среде она отмечается только в среднем. Поскольку снижение содержания липидов выявляется на раннем сроке и не исчезает через сутки, оно, вероятно, связано с более значительной деградацией липидов на начальном этапе переживания ткани, связанной с отсутствием ограничения аэробного катаболизма.

Содержание отдельных фракций общих липидов печени было довольно стабильным на протяжении инкубации в обеих средах, статистически достоверные различия касались только одной фракции – СЖК (таблица 18). Доля СЖК возросла уже после часа инкубации образцов как в условиях бескислородной среды, так и при помещении тканевых препаратов в насыщенную кислородом среду. Повышенным относительное количество СЖК по сравнению с начальным уровнем сохранялось и после суток инкубации in vitro. Увеличение содержания СЖК в ходе инкубации может объясняться гидролитическим распадом мембранных и запасных липидов с участием липаз и фосфолипаз (рис. 2).

В мышцах изменение содержания ОЛ при кислородных и бескислородных условиях инкубации в среднем подчинялось тем же закономерностям, что и в образцах печени (таблица 19). При нахождении мышечных препаратов в обескислороженной перед инкубацией среде количество ОЛ оставалось без статистически подтвержденных изменений через 1 ч и 24 ч, хотя в среднем обнаруживалась тенденция к снижению содержания ОЛ. При инкубации образцов мышечной ткани в среде, насыщенной кислородом, уровень общих липидов снижался более явно, достигая статистически значимо более низких величин по сравнению с начальными значениями. Та же тенденция и статистическая достоверность отмечались при экспозиции мышц in situ, и в этом случае средние величины содержания ОЛ были меньше, чем во всех экспериментах in vitro.

Анализ относительного содержания отдельных фракций липидов мышечной ткани показал, что наиболее стабильными в ходе инкубации были свободный и этерифицированный холестерин, не обнаружившие в среднем статистически значимых изменений (таблица 17). Изменений содержания ФЛ также не отмечались практически во всех экспериментах, а ТГ и СЖК, напротив, подвергались количественным изменениям in situ и in vitro. В образцах мышц, инкубированной в кислородной среде, через час возрастало содержание СЖК, а после суточной инкубации увеличение количества СЖК сопровождалось снижением уровня ТГ, что указывает на преимущественную активность липаз. В мышечных препаратах, инкубированных в изначально бескислородной среде в течение часа, отмечалось падение начального уровня ТГ в сочетании с увеличением содержания СЖК, показывая более раннюю активацию липаз, чем в кислородной среде. После 24 ч инкубации в той же среде уровень ТГ оставался пониженным. Сходные изменения обнаруживались при часовом выдерживании in situ, а после суток в таких условиях в мышечной ткани снижалось содержание не только ФЛ, но и ТГ на фоне повышения СЖК, указывая на наиболее глубокие деструктивные изменения, развивающиеся под действием липаз и фосфолипаз. При сравнении различных экспериментальных условий по количественному составу фракций не обнаруживаются различия между инкубированными мышечными образцами, но существенно отличаются результаты эксперимента in vitro и in situ. Так, после часовой посмертной инкубации in vitro в мышечной ткани остается больше ТГ независимо от начального содержания кислорода в среде, а при условии бескислородного начала инкубации через 24 часа в препарате мышцы остается больше ФЛ, чем in situ (рис. 1).

Таким образом, степень посмертной деградации липидов зависит от выбора модели инкубации, причем среда с низким содержанием кислорода замедляет разрушение липидов как в препаратах печени, так и в препаратах мышцы лягушки. Однако гипоксические условия in situ приводят к наиболее выраженной деградации запасных липидов и накоплению продуктов их распада. Выявленные закономерности необходимо учитывать при планировании условий переживания тканей в эксперименте и при трактовке результатов исследований с использованием подобного моделирования. Особенности изменений липидного компонента при различной степени насыщенности среды кислородом могут использоваться как аналитический компонент в исследовательской работе.

V. ВЫВОДЫ

1. После суточной инкубации in vitro в среде, насыщенной кислородом, содержание ОЛ в образцах печени и мышечной ткани снижалось по сравнению с начальным уровнем.

2. Инкубация in vitro приводила к увеличению содержания СЖК и уменьшению количества ТГ в мышечной ткани через 1 час при аноксических условиях и через 24 ч в нормоксической среде, в печени – к увеличению уровня СЖК при всех исследованных условиях.

3. В мышечной ткани после экспозиции in situ отмечено снижение уровня ТГ и накопление СЖК через 1ч, а также уменьшение содержания ФЛ и ОЛ через 24 часа.

4. В модели посмертных изменений in situ была более выражена гидролитическая деградация липидного компонента мышечной ткани, чем в модели in vitro.