рефераты конспекты курсовые дипломные лекции шпоры

Реферат Курсовая Конспект

Цитогенетический метод

Цитогенетический метод - раздел Биология, Методы изучения генетики человека Теоретическая Часть.Цитологический Метод Основан На Микроско...

Теоретическая часть.Цитологический метод основан на микроскопическом изучении хромосом в клетках человека. Цитогенетический метод широко применяется с 1956 года, когда Дж. Тио и Л. Леван установили, что в кариотипе человека 46 хромосом.

Цитогенетический метод основывается на данных о хромосомах. В 1960 году на научной конференции в Денвере была принята классификация идентифицируемых хромосом, в соответствии с которой им были даны номера, увеличивающиеся по мере уменьшения размеров хромосом. Эта классификация была уточнена на конференции в Лондоне (1963) и Чикаго (1966).

Применение цитогенетического метода позволяет изучать нормальную морфологию хромосом и кариотипа в целом, определять генетический пол организма, и, главное, диагностировать различные хромосомные болезни, связанные с изменением числа хромосом или с нарушением структуры хромосом. Цитогенетический метод позволяет изучать процессы мутагенеза на уровне хромосом и кариотипа. Метод широко применяется в медико-генетическом консультировании для целей пренатальной диагностики хромосомных болезней.

В соматических клетках человека диплоидный набор хромосом, 2n=46, а в половых – гаплоидный n=23. При оплодотворении диплоидный набор хромосом восстанавливается.

В хромосоме выделяют короткое (р) и длинное (q) плечи. Концы обоих плеч хромосомы называют теломерами. В метафазе митоза хромосомы представлены двумя сестринскими хроматидами, соединенными центромерой. В центромере содержится вещество – кинетохор, участвующее в формировании нитей веретена при клеточном делении.

При изучении кариотипа определяют следующие морфометрические характеристики хромосом: Lа – абсолютная длина хромосомы в мкм; Lр – длина короткого плеча; Lg – длина длинного плеча. Iв – плечевой индекс, Iс – центромерный индекс, Lr – относительная длина хромосомы, Ih - процент гетерохроматиновой зоны, Is – индекс спирализации. По значению плечевого индекса определяется форма хромосом. При Iв 1-1,9 хромосома называется равноплечей (метацентрической), 2-4,9 – слабонеравноплечей (субметацентрической), 5 и более – акроцентрической или резко неравноплечей.

Для кариотипирования подбирают метафазные пластинки в количестве не менее 30 с одинаковым индексом спирализации.

На основании различий в длине выделены 23 пары хромосом. По форме в кариотипе человека имеются метацентрические, субметацентрические и акроцентрические хромосомы. Отнесение хромосом к той или иной группе производится на основе расчета центромерного индекса. На основании размеров и комбинации плечевого и центромерного индексов хромосомы человека в соответствии с Международной Денверской классификацией (1960) сгруппированы в 7 групп, обозначаемых буквами английского алфавита: A, B, C, D, E, F, G.

 

Таблица 1 – Международная денверская классификация хромосом человека (1960г.)

Группа Номер пары хромосом Центромерный индекс Размеры и форма хромосом
A 0,48-0,49 Самые крупные, метацентрики
0,38-0,40 Самые крупные, метацентрики
0,45-0,46 Самые крупные, метацентрики
B 4,5 0,24-0,30 Крупные, субметацентрики
C 6-12 Х - хромосома 0,28-0,43 Среднего размера, метацентрики и субметацентрики. Группа включает 7 аутосом и Х-хромосому
D 13, 14, 15 до 0,15 Среднего размера, акроцентрики, характерна межиндивидуальная вариабельность и наличие спутников на коротких плечах
E 16-18 0,26-0,40 Относительно короткие метацентрики и субметацентрики
F 19,20 0,36-0,46 Небольшие метацентрики
G 21,22 Y - хромосома 0,13-0,33 Небольшие акроцентрики. Для аутосом характерно наличие спутников на коротких плечах

 

В настоящее время для идентификации хромосом в соответствии с номенклатурой ISCN-1995 (парижская номенклатура) все чаще используется дифференциальное окрашивание, которое на хромосомах дает полосы поперечной исчерченности, благодаря которым можно более точно идентифицировать пары гомологов.

Анализ кариотипа проводят в культуре делящихся соматических и половых клеток. Наиболее часто используют культуру клеток периферической крови, прежде всего лимфоцитов, костного мозга и фибробластов. Для анализа кариотипа плода используют различные клеточные культуры; их выбор определяется сроком беременности (до 12 недель – используют клетки ворсин хориона, в более поздние сроки – клетки плода, выделенные из амниотической жидкости, пуповинной крови и плаценты).

Цитологический анализ включает три основных этапа:

1) Культивирование клеток;

2) Окраска препарата;

3) Микроскопический анализ препарата.

Культивирование. Образец помещают в питательную солевую среду с добавлением цельной сыворотки крупного рогатого скота и белка бобовых растений – фитогемагглютинина, стимулирующего процесс деления клеток. Для увеличения числа метафазных клеток (кариотип изучают в метафазных клетках, где хромосомы достигают наибольшей спирализации и наиболее четко проявляется их форма) за 1,5 часа до окончания культивирования в культуру вводят колхицин (C22H25NO6), который разрушает клеточное веретено, приостанавливает деление клеток на стадии метафазы и увеличивает конденсацию (спирализацию) хромосом. Обычно культивирование составляет 72 часа. После этого клетки отделяют центрифугированием и помещением в гипотонический раствор хлорида калия или цитрата натрия. В гипотонической среде происходит разрыв ядерной оболочки и межхромосомных связей и хромосомы свободно перемещаются в цитоплазму. Затем производится фиксация клеток в фиксаторе Карнуа (3:1): 3 части составляет 96% этиловый спирт ректификат, 1 часть ледяная уксусная кислота.

После фиксации клеточную суспензию раскладывают на обезжиренные, охлажденные влажные предметные стекла и высушивают на воздухе.

Окраска. Наиболее простой метод окраски хромосом – это сплошная по Гимзе. Сплошная окраска применяется для определения количества хромосом, выявления геномных мутаций и анеуплоидии. Для выявления структурной перестройки хромосом (хромосомные мутации) используют дифференциальную окраску, в результате которой хромосомы приобретают поперечную исчерченность. Расположение и длина темных и светлых полос строго индивидуальна для каждой хромосомы, благодаря этому можно провести более точную идентификацию гомологичных пар и выявить перестройки хромосом.

Наиболее эффективен G-метод дифференциального окрашивания, для этого можно использовать краситель Гимзы, после предварительной обработки хромосом раствором трипсина. При таком окрашивании количество полос на хромосомах в метафазных пластинках достигает 400. Для дифокраски используют также R-метод, и Q-метод. После окраски объект заключают в Канадский бальзам, препарат становится постоянным и может храниться десятки лет.

Микрокопирование препаратов метафазных хромосом. Для описания кариотипа человека используется универсальная схема и специальные символы. Например, запись 46,хх – обозначает нормальный кариотип женщины, а 46, ху – нормальный кариотип мужчины. В ряде случаев при изучении хромосом обнаруживают полиморфизм, который наиболее характерен для акроцентрических хромосом и, как правило, отражает вариабельность размеров гетерохроматиновых сегментов, наличие спутников, спутничных нитей в области коротких плеч и их величину. В табл. 2 приведены некоторые из них.

Установлено, что наличие нормального полиморфизма хромосом увеличивает риск рождения ребенка с хромосомными аномалиями.

Среди супружеских пар, у которых наблюдалось рождение детей с пороками развития, а также страдающих бесплодием и привычным невынашиванием беременности, чаще выявляется носительство хромосом с крупными гетерохроматиновыми блоками. Преобладание лиц с увеличенными гетерохроматиновыми сегментами в акроцентрических хромосомах, а также в хромосомах 1, 9 и 16 отмечено в группе детей с множественными врожденными пороками развития.

 

Таблица 2 – Обозначение полиморфизма хромосом человека

Символы кариотипа Тип хромосомной перестройки
46,ХХ,9qh+ Увеличение размера гетерохроматинового участка в длинном плече хромосомы 9 женщины
46,XY,Yqh- Уменьшение размера гетерохроматинового района на длинном плече Y хромосомы у мужчины
46, XX,22ps+ Увеличение размера спутников на коротком плече хромосомы 22 у женщины
46,XY,21pstk Увеличение длины спутничных нитей на коротком плече хромосомы 21 у мужчины
46,XX,fra(16)(q21.3) Ломкий сайт в сегменте 21 длинного плеча хромосомы 16
46,XX,15pss Появление двойных спутников на коротком плече хромосомы 15 у женщины
46,XX,21ps+ Увеличение размера спутников на коротком плече хромосомы 21 у женщины

 

 

Следуя рекомендациям IV Международного конгресса по генетике человека в Париже (1971), при описании добавочных хромосом их номер помещают после общего числа аутосом и половых хромосом со знаком «плюс» или «минус» перед номером вовлеченной аутосомы. Например, запись (формула) 47,ХХ+21 обозначает кариотип женщины с трисомией по 21 паре хромосом. Напротив, кариотип мужчины с экстрахромосомой Х изображают как 47,ХХY. Знак «плюс» или «минус» ставят после символа хромосомы, чтобы указать удлинение или укорочение ее плеча. Буква q символизирует длинное плечо, а p – короткое. Например, запись 46,ХY,1q+ указывает на увеличение длинного плеча хромосомы 1. Формула 47,ХY+14р+ - кариотип мужчины с 47 хромосомами, включая и дополнительную хромосому 14 с удлинением ее короткого плеча.

Сокращение – def (дефишенс), dup (дупликация), r (кольцо, возникающее после воссоединения двух разрывов в хромосоме), inv (инверсия) и t (транслокация) – обозначают аберрации хромосом. Номера хромосомы или хромосом помещают после сокращений в скобках. Например, запись 46,ХХ,r(18) означает кариотип женщины с 46 хромосомами, включая r-хромосому 18. Формула 46,Х,inv(Хq) – кариотип женщины с 46 хромосомами, включая одну нормальную Х-хромосому и изохромосому Х (с двумя генетически идентичными длинными плечами). Банды помечаются числами по мере удаления от центромеры вдоль короткого (р) и длинного (q) плечей хромосомы.

С помощью цитогенетического метода выявлены хромосомные мутации типа реципрокных транслокаций, робертсоновских транслокаций и делеций. Так, транслокация 21-й хромосомы на другую 21, 22, 13, 14 или 15 вызывает синдром Дауна. Так, делеция короткого плеча Х-хромосомы (трактуется как моносомия по Х-хромосоме) укорочение короткого плеча 21-й хромосомы (филадельфийская хромосома), делеция короткого плеча хромосомы 5-й пары (синдром «кошачьего крика»), делеция длинного и короткого плеча 18-й хромосомы (нарушение строения лица, скелета, умственная отсталость, гипотрофия, гипотония и многие другие аномалии). В результате двух концевых нехваток образуются кольцевые хромосомы. При кольцевой 5-й хромосоме развивается синдром «кошачьего крика», в х-хромосоме – клиническая картина близка синдрому Шерешевского-Тернера. Среди геномных мутаций наиболее часто встречается синдром Дауна (трисомия по 21 паре). Трисомия по 13 хромосоме вызывает синдром Патау, по 18 хромосоме – синдром Эдвардса. Среди анеуплоидных синдромов по половым хромосомам (ХО) – синдром Шершевского-Тернера. Полисомия по Х хромосоме называется синдром Клайнфельтера (ХХY), встречаются отклонения по числу половых хромосом (ХХХY, XYY и др.) и синдром ТриплоХ.

 

Метод определения полового хроматина. Это экспресс метод, позволяющий выявить изменения числа половых хромосом в неделящихся клетках слизистой оболочки щеки. Половой хроматин, или тельце Барра, образуется одной из хромосом женского организма. Оно выглядит как интенсивно окрашенная глыбка, расположенная вблизи ядерной оболочки. При увеличении количества Х-хромосом в кариотипе организма образуются тельца Барра в количестве на единицу меньше числа Х-хромосом. При моносомии по Х-хромосоме тельце Барра отсутствует. Y-хромосома в мужском кариотипе обнаруживается по более интенсивной люминесценции при обработке акрихинипритом и излучении в ультрафиолетовом свете.

Задание 1. Изучите конспект лекции и материал учебников.

Задание 2. Запишите в словарь и выучите основные термины и понятия: хромосома, плечо хромосомы, центромер (кинетохор), различия хромосом по форме (метацентрическая, субметацентрическая, акроцентрическая), проксимальный, дистальный и теломерный участок плеча, вторичная перетяжка, спутник, спутничные хромосомы, SAT-хромосомы, дизоксирибонуклеопротеиды (ДНП): эухроматин, гетерохроматин, метафазная пластинка. Кариотип, гомологичные хромосомы, изохромосомы, кариограмма, идиограмма, морфометрические параметры (абсолютная длина хромосомы, плечевой индекс, центромерный индекс, относительная длина, процент гетерохроматиновой зоны, индекс спирализации, нуклеосома, нуклеосомная нить, элементарная хроматиновая фибрилла, интерфазная хромонема, метафазная хроматида, политенная хромосома, хромосома типа ламповых щеток, гаплоидный набор хромосом, диплоидный набор хромосом, половые хромосомы, аутосомы, В-хромосомы.

Задание 3. Зарисуйте строение метафазной хромосомы, спутничной хромосомы, политенной хромосомы, хромосомы типа ламповых щеток.

Задание 4. Подсчитайте число хромосом на метафазной пластинке. Постройте идиограмму (по заданию преподавателя) на основании унифицированной номенклатуры.

Задание 5. Измерьте абсолютную длину и плечи хромосом (в мм) и данные занесите в табл. 3.

Таблица 3 – Параметры хромосом

№ пары гомоло-гичных хромосом № хромо-сомы в паре (1,2) Длина, в мм Lh длина гетерохрама-тина Примеча-ния
Общая La Длинного плеча, Lp Короткого плеча, Lq
I          

 

Число строк в таблице должно соответствовать числу хромосом изучаемого кариотипа.

Задание 6. Вычислите индекс спирализации Is и значения морфометрических показателей La, Ir, Ib, Ic, Ih и занесите их в таблицу 2.

Абсолютная длина самой хорошо заметной хромосомы (ее называют тестерная) хромосомы измеряется при микрокопировании, с помощью окуляр-микрометра и выражается в мкм. Затем вычисляется коэффициент увеличения хромосом на фотографии метафазной пластинки, а затем – через коэффициент увеличения – вычисляется абсолютная длина каждой хромосомы кариотипа. Например, длина тестерной хромосомы La1.1 на фотографии равна 27 мм, или 27×1000мкм, физическая или абсолютная длина этой же хромосомы La1.1 составляет 10,5 мкм, тогда коэффициент увеличения .

В нашем примере . Далее, например La’1.2=26,5 мм. . La, выраженную в мкм, заносим в таблицу 4.

%, ; , . Is вычисляется как отношение суммы абсолютной длины 2-х самых коротких хромосом к сумме абсолютной длины 2-х самых длинных хромосом.

 

Таблица 4 – Основные морфометрические параметры хромосом

Группа, № пары гомоло-гичных хромосом № хромо-сомы в паре La мкм Ir, % Ib Ic Ih, %
I          

 

Число строк в таблице должно соответствовать числу хромосом изучаемого кариотипа.

Задание 7. Проанализируйте данные идиограмм и таблиц, используя представления о морфологическом подобии гомологичных хромосом и их числе в кариотипе.

Сделайте вывод по результатам выполненной работы.

 

Задание 8. Ответьте на вопросы для самопроверки:

1. Раскройте понятия кариотип, кариограмма, идиограмма.

2. Каковы химический состав, строение и морфология хромосом.

3. В чем заключается содержание цитогенетического метода, каковы его возможности.

4. Какое значение имеет дифокраска хромосом.

5. Опишите степени упаковки ДНК в метафазную хромосому (нуклеосома, нуклеосомная нить, хромонема).

6. Охарактеризуйте различные типы хромосом.

7. Приведите примеры хромосомных и геномных мутаций у человека.

 

Задание 9. В нормальном кариотипе человека присутствуют 44 аутосомы и 2 половые хромосомы (ХХ либо ХY). В случае истинного гермафродизма (одновременно мужские и женские половые железы у индивидуума) в организме обнаруживают два клона клеток, отличающихся по составу половых хромосом (XX/XY).

а) Сделайте символическую запись нормального кариотипа женщины и мужчины.

б) Сделайте запись кариотипа человека с истинным гермафродитизмом.

Задание 10. Сделайте расшифровку кариотипов больных людей: 1) 47, XY,+G; 2) 46,XX,1p+; 3) 46,XY,14q-; 4) 47,XX,+14p+; 5) 46,XX,del(1)(q21); 6) 46,XY,t(2;5)(q21;q31); 7) 46,XX,r(18). Примечание: del – делеция, t – транслокация, r – кольцевая хромосома.

Задание 11. Сколько телец полового хроматина можно обнаружить в большинстве интерфазных клеток людей с кариотипами: 1)46,XX; 2)46,XY; 3)47,XXY; 4) 48,XXXY; 5) 45,X; 6)47,XXX; 7)48,XXXX; 8)49,XXXXX?

Форма отчета:

- представление на проверку оформленной тетради и устная защита работы;

- выполнение проверочного теста. Работа по изучению кариотипа должна быть оформлена как отдельное задание.

 

– Конец работы –

Эта тема принадлежит разделу:

Методы изучения генетики человека

высшего профессионального образования Новгородский... государственный университет имени Ярослава Мудрого... В М Кондратьева...

Если Вам нужно дополнительный материал на эту тему, или Вы не нашли то, что искали, рекомендуем воспользоваться поиском по нашей базе работ: Цитогенетический метод

Что будем делать с полученным материалом:

Если этот материал оказался полезным ля Вас, Вы можете сохранить его на свою страничку в социальных сетях:

Все темы данного раздела:

Кондратьева В. М., Максимюк Н.Н.
М 18 Методы изучения генетики человека: учебно-метод. пособие / В.М. Кондратьева, Н.Н. Максимюк: НовГУ имени Ярослава Мудрого. Великий Новгород, 2010. 60 с. В пособии представлена характер

Клинико-генеалогический метод
Теоретическая часть. Клинико-генеалогический метод был предложен в 1865 году Ф. Гальтоном. Метод основан на прослеживании интересующего нас признака (нормального или патологическог

Вопросы для самоконтроля
1. Что изучает генеалогический метод. 2. Каковы возможности и недостатки генеалогического метода. 3. Как построить родословную. 4. Как провести генетический анализ родосл

Популяционно-статистический метод
Теоретическая часть.Методы, используемые для установления частот генов и генотипов в популяции, демонстрирующие характер их изменения под влиянием окружающей среды и различных факт

Применение закона Харди-Вайнберга
Одно из важнейших применений закона Харди-Вайнберга состоит в том, что он дает возможность рассчитать некоторые из частот генов и генотипов в том случае, когда не все генотипы могут быть идентифици

Метод дерматоглифики и пальмоскопии
Теоретическая часть. Метод предложен в 1892г. Ф. Гальтоном. Основан метод на изучении кожных узоров пальцев и ладоней, а также сгибательных ладонных борозд. Ф. Гальтон установил, ч

Методы генетики соматических клеток
Теоретическая часть. Методы генетики соматических клеток в значительной мере компенсируют невозможность применения к человеку метода гибридологического анализа. Благодаря разработк

Близнецовый метод
Метод предложен в 1875 г. Гальтоном первоначально для оценки роли наследственности и среды в развитии психических свойств человека. В настоящее время метод широко применяется в изучении наследствен

Пренатальная диагностика наследственных заболеваний
Изучение клеточного материала развивающегося плода методами генетики соматических клеток, молекулярной биологии, цитологических и биохимических методов дает возможность ранней диагностики наследств

Медико-генетическое консультирование
Эффективным способом профилактики наследственных болезней является медико-генетическое консультирование. Медико-генетическое консультирование – это вид специализированной помощи населению,

Среднее значение признака
  Полученные при проведении обследования данные характеризуют каждую особь совокупности в отдельности. Нас же интересуют, в первую очередь, наиболее общие свойства этой совокупности.

Средняя арифметическая
Средняя арифметическая представляет собой точку равновесия вариационного ряда, отклонения от которой в сторону увеличения или уменьшения признака взаимно уравновешиваются. Средняя арифметическая по

Показатели изменчивости
Средние величины характеризуют всю выборку в целом. Но основное свойство ее членов – св

Вычисление среднего квадратического отклонения для больших выборок
  Задание. Вычислить среднее квадратическое отклонение (S) для данной группы спортсменов по весу 1 Составить вариационный ряд (табл. 14). 2 Определить частоту

Нормированное отклонение
  Нормированное отклонение – это показатель, характеризующий отдельную варианту или группу вариант. Обозначается буквой Н.  

Ошибки статистических величин
  Для изучения изменчивости того или иного признака берут не всех представителей, а только часть их (выборочную совокупность или выборку). В каждом конкретном случае в выборку могут п

Критерий достоверности и достоверность разности между средними
     

Методы изучения генетики человека
Учебно-методическое пособие   Оригинал-макет подготовлен кафедрой ББХ НовГУ __________________________________________________________________ Изд. л

Хотите получать на электронную почту самые свежие новости?
Education Insider Sample
Подпишитесь на Нашу рассылку
Наша политика приватности обеспечивает 100% безопасность и анонимность Ваших E-Mail
Реклама
Соответствующий теме материал
  • Похожее
  • Популярное
  • Облако тегов
  • Здесь
  • Временно
  • Пусто
Теги