рефераты конспекты курсовые дипломные лекции шпоры

Реферат Курсовая Конспект

Техника окраски сложным методом

Техника окраски сложным методом - раздел Биология, РУКОВОДСТВО К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ по дисциплине ОСНОВЫ МИКРОБИОЛОГИИ Сложные Методы Окраски Основаны На Особенностях Физико-Химического Строения М...

Сложные методы окраски основаны на особенностях физико-химического строения микробной клетки. Сущность этих методов заключается в воздействии на мазок двух красящих веществ, из которых одно является основной, главной краской, а другое дополнительной - контраст. После воздействия первой краской мазок обесцвечивают и только после этого подвергают дополнительной окраске. В качестве обесцвечивающих веществ может быть применен целый ряд химических реагентов (кислоты, щелочи, спирт, ацетон и др.). Обмывание мазка простой водой также является в какой-то степени чисто механическим процессом обесцвечивания, но для этого необходимо продолжительное время; кроме того, обесцвечивание получается неполное. По отношению к обесцвечивающим веществам можно разбить микробов на группы легко и трудно обесцвечиваемых, Не все виды микробов одинаково относятся к обесцвечивающим реагентам; некоторые являются кислото - и спиртоустойчивыми, другие только кислотоустойчивы. Наконец, некоторые, как, например, споры, энергично противостоящие воздействию всех обесцвечивающих веществ, относятся к группе краскоустойчивых.

Сложные методы окраски имеют важное дифференциально-диагностическое значение для характеристики изучаемого микроба.

 

Окраска по Граму

1. На фиксированный мазок кладут кусочек фильтровальной бумаги пропитанной 1%-ым спиртовым раствором генцианвиолета. Наносят на бумажку 2-3 капли воды. Окрашивают 2-3 минуты.

2. Бумажку снимают и, не промывая препарата водой, наносят раствор Люголя на 2 минуты.

3. Сливают раствор Люголя и препарат обрабатывают 96%-ным этиловым спиртом в течение 20-30 секунд.

4. Тщательно промывают мазок водой.

5. Окрашивают мазок фуксином Пфейффера в течение 2-3 минут.

6. Препарат промывают водой.

7. Высушивают и микроскопируют.

Грамположительные микроорганизмы окрашиваются в фиолетовый цвет, а грамотрицательные - в розовый.

Этот метод позволяет все микроорганизмы дифференцировать на две группы: грамположительные (гр+) и грамотрицательные (гр–).

Сущность окраски по Граму состоит в том, что отношение к краскам зависит от химического состава клетки и структурных особенностей клеточной стенки (наличие муреина и частично липида). В составе клеточной стенки грамположительных микроорганизмов большое количество муреина, воздействие этиловым спиртом вызывает разбухание муреина, что приводит к уменьшению диаметра пор и снижению проницаемости клеточной стенки. Поэтому не происходит вымывания красителя и обесцвечивания микробной клетки. В клеточной стенке грамотрицательных микроорганизмов муреиновый слой меньших размеров, диаметр пор больше и спирт легко проходит через клеточную стенку, вымывая краситель. Микробная клетка принимает цвет дополнительного красителя (красный). Кроме того, в поверхностном слое грамположительных микроорганизмов находиться магниевая соль рибонулеиновой кислоты, которая в присутствии йода в кислой среде образует прочное соединение с основными красителями. Это так же препятствует обесцвечиванию их спиртом.

Пример: Escherichia coli (кишечная палочка) и Salmonella cholerae suis (возбудитель сальмонеллеза свиней) - грамотрицательные и окрашиваются в розово-красный цвет. Listeria monocitogenes (возбудитель листериоза), Streptococcus ecqui (возбудитель мыта) - грамположительные и окрашиваются генцианвиолетом в фиолетовый цвет.

 

Окраска кислотоустойчивых микроорганизмов

В природе существует группа микроорганизмов, устойчивых к действию кислот, щелочей и спиртов. Они относятся к роду Mycobacterium (возбудители туберкулеза, паратуберкулеза крупного рогатого скота, проказы человека). Химическая структура цитоплазмы и клеточной оболочки микроорганизмов данной группы отличается содержанием значительного количества жировосковых веществ, в частности стеариновых кислот (в том числе фтионовой кислоты до 40%), поэтому проникновение красителя в клетку затруднено. Для их окраски используют протравливание (нагревание мазка с красителем над пламенем). Окрасившись, они прочно удерживают краску и не обесцвечиваются кратковременным действием кислоты.

Окраска по Циль-Нильсену

1.Фиксированный на пламени мазок покрывают полоской фильтровальной бумаги, наливают на нее карболовый раствор фуксина и подогревают; при появлении паров прекращают нагревание и оставляют краску на препарате еще на несколько минут (2-3 минуты). Дав препарату остыть, удаляют пинцетом бумажку и обмывают мазок водой.

2.Обесцвечивают препарат 5-10 % водным раствором серной кислоты в течение 3-5 секунд (до желтоватого оттенка мазка). Вместо серной кислоты можно применить 5 % раствор азотной или 3 % раствор соляной кислоты.

3.Мазок тщательно промывают водой.

4.Споласкивают 96°спиртом.

5.Снова промывают водой.

6.Докрашивают в течение 3-5 минут леффлеровской метиленовой синькой или водным раствором 1: 1000 малахитовой зе­лени или метиловой зелени.

7.Краску смывают водой и препарат высушивают.

Микроскопическая картина: туберкулезные палочки - рубиново красные, остальные, за исключением возбудителя паратуберкулеза, кислото - и спиртоустойчивых сапрофитов, - синие.

Для обесцвечивания мазков при окраске по Циль-Нильсену вместо растворов кислот и спирта особо рекомендуется применение солянокислого алкоголя (соляной кислоты - 3 мл+96° спирта - 97 мл) до слабо заметного розоватого оттенка препарата. После этого мазок ополаскивают водой и докрашивают метиленовой синькой и т. д. по основной прописи. Указанным методом достигается одновременное испытание бацилл на кислото - и спиртоустойчивость. Среди видов кислотоустойчивых сапрофитов встречаются спиртоподатливые разновидности, палочки же туберкулеза и паратуберкулеза всегда кислото - и спиртоустойчивы.

– Конец работы –

Эта тема принадлежит разделу:

РУКОВОДСТВО К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ по дисциплине ОСНОВЫ МИКРОБИОЛОГИИ

ФГОУ ВПО Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия... Феоктистова Н А Васильев Д А...

Если Вам нужно дополнительный материал на эту тему, или Вы не нашли то, что искали, рекомендуем воспользоваться поиском по нашей базе работ: Техника окраски сложным методом

Что будем делать с полученным материалом:

Если этот материал оказался полезным ля Вас, Вы можете сохранить его на свою страничку в социальных сетях:

Все темы данного раздела:

ББК 30.609
Составители: Феоктистова Н.А., Васильев Д.А. «Руководство к практическим занятиям» предназначено для освоения программы по дисциплине «Основы микробиологии» спе

Формы микроорганизмов.
  Цель занятия. Усвоить правила работы в бактериологической лаборатории. Ознакомиться с техникой безопасности и личной профилактикой. Освоить работу с микроскопом и о

Правила работы в лаборатории
1. В помещение входить только в халате и белой шапочке (косынке). 2. В лабораторию нельзя вносить посторонние вещи, продукты. 3. В помещении лаборатории категорически запрещается

Подготовка бокса к работе
Ежедневно перед началом работы полы протирают дезинфицирующим веществом (2-5 % раствором хлорамина); воздух обеззараживают бактерицидными лампами, установленными на высоте 2-2,5 м от поверхности по

Устройство биологического микроскопа
  Микроскоп - сложный оптический прибор, используемый для изучения морфологии и тинкториальных свойств микроорганизмов. Принципиально все микроскопы устроены один

Работа с иммерсионной системой
Объективы малого увеличения (´3,5, ´8, ´9) применяют главным образом для предварительного осмотра препарата. Объективы среднего увеличения (´20, ´40) применяю

Морфология бактерий
По форме бактерий подразделяют на три основные группы: шаровидные (кокки), цилиндрические (палочки) и извитые (рис. 3). Для различных видов кокков характерно своеоб

Методы работы с микроорганизмами
  Цель занятия. Овладеть методикой приготовления мазка-препарата для микроскопии из микробной взвеси. Ознакомиться с методами приготовления красящих растворов. Отрабо

Техника приготовления мазков
Исследуемый материал распределяют тонким слоем по поверхности предметного хорошо обезжиренного стекла. Мазки готовят из культур микробов, патологического материала (мокрота, гной, моча, кр

Высушивание и фиксирование мазков
Приготовленный на предметном стекле мазок высушивают и после высыхания фиксируют. При фиксировании мазок закрепляется на поверхности предметного стекла, и поэтому при последующей окраске препарата

Краски, применяемые в микробиологической практике
Для окрашивания микробов используют анилиновые красители (основные, кислые и нейтральные). Микроорганизмы лучше окрашиваются основными красками. Для окраски препаратов готовят спиртовые, водно-спир

Техника окраски простым методом
1. При простом методе окраски на фиксированный мазок наливают несколько капель какого-либо спиртоводного или водного раствора красок на 1—2 минуты; чаще всего для этой цели применяется фуксин 1: 10

Окраска спор
При неблагоприятных условиях для микробов (отсутствие питательной среды, высушивание, неблагоприятная температура и др.) в цитоплазме некоторых микроорганизмов образуются споры. Формируются они вну

Окраска капсул
Тело микробной клетки покрыто рыхлым слизистым слоем. У некоторых видов микроорганизмов этот слой развивается очень сильно и тогда он называется капсулой. Капсула - муциноподобное вещество, высо

Определение подвижности бактерий
Подвижности бактерий важный видовой признак и производиться при диагностических исследованиях: результат учитывают при идентификации микроорганизмов. У подвижных видов способность самостоятельного

Определение подвижности микроорганизмов
Определение подвижности бактерий методом «висячая капля» Каплю молодой (18-20 часовой) бульонной культуры бактерий бактериологической петлей наносят на покровное ст

Изучение морфологии бактерий
  Цель занятия. Изучить и описать колонии бактерий, выросших на агаризованной среде, величину, край профиль колоний; приготовить препараты бактерий, определить форму

Методика выполнения лабораторной работы
1.Изучить и описать колонии бактерий, выращенных на плотной питательной среде в чашках Петри; результаты представить в табл. 1 - размер (диаметр) измеряют линейкой в милли

Идентификация грибов до рода
Цель работы:изучить и описать культуральные признаки плесневых грибов, изучить морфологические признаки плесневых грибов, определить род плесневых грибов, используя ключ Никитинско

Методика выполнения лабораторной работы
1.Изучить культуральные признаки плесневых грибов. Большинство плесневых грибов, развиваясь на предметах окружающей среды пищевых продуктах, размножаются бесполым путем (оидиями, к

Ключ для определения рода плесневого гриба
1. Грибы размножаются спорангиоспорами, находящимися внутри спорангиев. 2. Грибы размножаются конидиями, образующимися снаружи на особых конидиеносцах, реже — прямо на мицелии Спорангиенос

Хотите получать на электронную почту самые свежие новости?
Education Insider Sample
Подпишитесь на Нашу рассылку
Наша политика приватности обеспечивает 100% безопасность и анонимность Ваших E-Mail
Реклама
Соответствующий теме материал
  • Похожее
  • Популярное
  • Облако тегов
  • Здесь
  • Временно
  • Пусто
Теги