Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам делятся на 2 группы: диффузионные и методы разведения.
Минимальная подавляющая концентрация – наименьшая концентрация антибиотика (в мг/л или мкг/мл), которая in vitro полностью подавляет видимый рост бактерий.
Диффузионные методы
При определении чувствительности диско-диффузионным методом на поверхность агара в чашке Петри наносят бактериальную суспензию и затем помещают диски, содержащие определенное количество антибиотика. Диффузия антибиотика в агар приводит к формированию зоны подавления роста микроорганизмов вокруг дисков. После инкубации чашек в термостате при температуре 35 – 37°С в течение ночи учитывают результат путем измерения диаметра зоны вокруг диска в миллиметрах.
Е-тесты. Определение чувствительности микроорганизма проводится аналогично тестированию диско-диффузионным методом. Отличие состоит в том, что вместо диска с антибиотиком используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной. В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК).
Достоинством диффузионных методов является простота тестирования и доступность выполнения в любой бактериологической лаборатории.
Методы разведения
Методы разведения основаны на использовании двойных разведений концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (например, от 128, 64 мкг/мл и т.д. до 0,5, 0,25 и 0,125 мкг/мл). Антибиотик в различных концентрациях вносят в жидкую питательную среду (бульон) или агар. Затем бактериальную суспензию, помещают в бульон с антибиотиком или на поверхность агара в чашке. После инкубации в течение ночи при температуре 35 – 37°С проводят учет полученных результатов.
Наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) или на поверхности агара свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность. По мере увеличения концентрации антибиотика рост микроорганизма уменьшается. Первую наименьшую концентрацию антибиотика (из серии последовательных разведений), при которой визуально не определяется бактериальный рост, принято считать МПК. Измеряется МПК в мг/л или мкг/мл.
В последние годы в практике широко применяется полимеразная цепная реакция для выявления у микробов специфических генов, ответственных за формирование лекарственной устойчивости (геноиндикация антибиотикоустойчивых культур).
Контроль качества исследований антибиотикорезистентности основан на параллельной оценке клинических штаммов и контрольных штаммов микроорганизмов.