Микроскопический метод диагностики, как правило, не используется, так как патогенные и непатогенные энтеробактерии имеют общие морфологические свойства.
Бактериологический метод
Забор материала. Характер материала зависит от локализации микроба — возбудителя. Чаще всего в качестве исследуемого материала служат испражнения. Также исследуется моча, мокрота, раневое отделяемое, кровь.
Питательные среды, используемые для бактериологического исследования, подразделяются на три группы:
1. Среды обогащения. Создают условия размножения выделяемого возбудителя и основаны либо на наличии в среде факторов активации роста данного микроба, либо подавлении роста сопутствующей микрофлоры.
Первому принципу соответствует среда Раппопорт, второму — селенитовый бульон, магниевая, Мюллера.
2. Дифференциально-диагностические средыЭндо, Левина, Плоскирева — плотные агаризованные среды, содержащие дифференцирующий углевод лактозу и обесцвеченный индикатор.
Разлагающие лактозу кишечные палочки дают рост окрашенных колоний в зависимости от типа среды: красный (среда Эндо), темно-синий (среда Левина). Лактозонегативные энтеробактерии на средах Эндо, Левина, Плоскирева дают бесцветные колонии.
3. Среды накопления чистой культуры ― двухсахарный агар Клиглера. Среда состоит из столбика и скошенной части агаризованный среды с лактозой и глюкозой, индикатором и реагентами для определения сероводорода и уреазы.
Посев производят штрихом по поверхности скошенной части и уколом в столбик. При росте микробов глюкоза лучше разлагается в столбике, лактоза на скосе, в результате чего дифференцированно меняется цвет среды.
· Ферментация лактозы — изменение цвета скоса.
· Ферментация глюкозы — изменение цвета столбика.
· При образовании газа — пузырьки и разрывы в среде.
· При продукции сероводорода — почернение по ходу укола.
· При ферментации мочевины — изменение цвета среды на малиновый.
Идентификация выделенных чистых культур основана на морфологических, культуральных, биохимических признаках и антигенной структуре:
а) грамотрицательные палочки (признак общий для семейства);
б) наличие капсулы (у клебсиелл);
в) цвет колоний на чашечных средах;
г) подвижность (сальмонеллы и эшерихии подвижны, шигеллы и клебсиеллы неподвижны);
д) биохимические свойства (ферментация углеводов пестрого ряда Гисса, продукция индола, сероводорода, аммиака и др.);
е) антигенная структура. Определяют в реакции агглютинации с поливалентными и монорецепторными агглютинирующими сыворотками — серотипирование до серогруппы и серовара.