Реферат Курсовая Конспект
Кількісний облік мікроорганізмів шляхом підрахунку колоній - раздел Высокие технологии, Харчові технології та інженерія (Чашковий Метод Коха) Цей Метод Є Найбільш Поширени...
|
(чашковий метод Коха)
Цей метод є найбільш поширеним для визначення спільного мікробного забруднення різних субстратів. Суть чашкового методу полягає в тому, що проводять посів певного об'єму досліджуваного матеріалу в чашки Петрі з твердим поживним середовищем. При подальшому вирощуванні посіву в термостаті з кожної клітини внаслідок розмноження утворюється колонія. Кількість колоній підраховують.
Як поживне середовище для обліку бактерій застосовують м’ясопептонний агар, для підрахунку цвілевих грибів і дріжджів – сусло-агар.
Робота за таким методом включає три етапи: приготування розведень, посів на тверде поживне середовище в чашки Петрі і підрахунок колоній, що виросли.
Приготування розведень. Кількість мікроорганізмів в об'єктах зовнішнього середовища, як правило, велика, тому для отримання окремих колоній готують ряд розведень досліджуваного субстрата.
Розведення готують у стерильній водопровідній воді або фізіологічному розчині (0,5% водний розчин NаСl), зазвичай використовують десятиразові послідовні розведення (1:10, 1:100, 1:1000 і т. п.).
Рис. 16. Приготування послідовних розведень.
Ступінь розведення досліджуваного зразка визначається передбачуваною кількістю мікроорганізмів в зразку. Відповідно число розведень тим більше, чим більше мікроорганізмів в вихідному субстраті.
Для приготування кожного розведення обов'язково використовують окрему піпетку! Нехтування цим правилом може привести до отримання помилкового результату, інколи в 1000 і більше разів того, що перевищує достеменний. Помилка пов'язана з адсорбцією мікроорганізмів на стінках піпетки, внаслідок чого не всі клітини видаляються з піпетки при приготуванні відповідного розведення. Частина клітин, що залишилася на стінках піпетки, може потім потрапити в одне з подальших розведень, що і з'явиться причиною отриманняі завищеного результату.
Посів на агаризовані середовища в чашки Петрі для поверхневого зростання.
У стерильні чашки Петрі наливають розплавлену на киплячій водяній бані агаризоване середовище, по 20–30 мл в кожну. Чашки залишають на горизонтальній поверхні, поки не захолоне агар. Потім їх витримують при 30°С кришками вниз для підсихання поверхні середовища в термостаті. Коли використовують елективні середовища або виділяють і враховують мікроорганізми, що вимагають підвищеної вологості, посів проводять відразу ж або незабаром після застигання агару.
Посів роблять з певних розведень залежно від передбачуваної кількості мікроорганізмів в досліджуваному субстраті. Стерильною піпеткою наносять певний об'єм (зазвичай 0,05, 0,1 або 0,2 мл) відповідного розведення, заздалегідь ретельно перемішаного, на поверхню агарової пластинки в чашці Петрі. Цей об'єм розподіляють по поверхні середовища стерильним шпателем. Потім цим же шпателем проводять по всій поверхні в другій чашці, куди посівний матеріал не вносили. При виявленні мікроорганізмів, кількість яких в субстраті відносно невелика, посівний матеріал розподіляють по поверхні середовища тільки в одній чашці Петрі.
З кожного розведення роблять 4–6 паралельних посівів. Для паралельних посівів з одного розведення можна користуватися однією стерильною піпеткою і одним шпателем. Для посівів з різних розведень, використовують нову стерильну піпетку і новий шпатель. Чашки із засіяним середовищем поміщають в термостат, відрегульований на певну температуру, сприятливу для розвитку мікроорганізмів, перевернувши їх догори дном.
Для глибинного посіву (у товщі середовища) використовують зазвичай мірні кількості твердого середовища, заготовлені в пробірках по 10–15 мл Культуру вносять до пробірок з розплавленим і охолодженим до 40–45°С агаром, а потім заливають суміш в чашку Петрі. Можливий і інший спосіб глибинного посіву: суспензію мікроорганізмів вносять безпосередньо до стерильної чашки Петрі на дно, злегка прочинивши кришку, а потім заливають її розплавленим і охолодженим агаром. Середовище з культурою ретельно перемішують круговими рухами чашки, не піднімаючи її з поверхні столу. Після цього чашку залишають на столі до застигання агару.
– Конец работы –
Эта тема принадлежит разделу:
НАЦІОНАЛЬНИЙ ТЕХНІЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ... ХАРКІВСЬКИЙ ПОЛІТЕХНІЧНИЙ ІНСТИТУТ... МЕТОДИЧНІ ВКАЗІВКИ...
Если Вам нужно дополнительный материал на эту тему, или Вы не нашли то, что искали, рекомендуем воспользоваться поиском по нашей базе работ: Кількісний облік мікроорганізмів шляхом підрахунку колоній
Если этот материал оказался полезным ля Вас, Вы можете сохранить его на свою страничку в социальных сетях:
Твитнуть |
Новости и инфо для студентов