Порядок узяття проб, методи їх дослідження і нормативи якості регламентуються нормативно-технічною документацією.
Вихідним матеріалом для посівів продуктів твердої консистенції зазвичай є 10 % суспензія продукту. При дослідженні продукту твердої консистенції за допомогою годинникого скла і стерильного скальпеля беруть пробу продукту (1–15 г), переносять в стерильну ступку (або гомогенізатор) і розтерають в однорідну масу (можна додати стерильний кварцевий пісок). Отриману наважку кількісно і асептично переносять в колбу з 100 мл стерильного фізіологічного розчину (або стерильної водопроводної води) – це перше розведення (1:100).
Рідкі і напіврідкі продукти ретельно перемішують і в разі різкої кислої реакції підлужують 10%-ним стерильним розчином бікарбонату натрію до рН 7,2–7,4. Рідкий продукт або отриману суспензію твердого продукту використовують для приготування набору розведень, кількість яких залежно від характеру продукту і від передбачуваного обсіменіння.
Суспензію в колбі ретельно збовтують протягом 3–5 хв, стерильною піпеткою беруть 1 мл отриманої суспензії і переносять в пробірку з 9 мл стерильного розчину NaCl. Це друге розведення 1:103. Суспензію цього розведення перемішують за допомогою іншої стерильної піпетки, вбираючи і випускаючи з неї отриману суспензію. Цю процедуру повторюють 3–5 разів, що забезпечує перемішування суспензій і зменшує адсорбцію кліток на стінках піпетки. Потім піпеткою беруть 1 мл цієї суспензії і переносять її в іншу пробірку – це розведення 1:104. Таким же чином, готують і подальші розведення.
Загальну кількість бактерій в 1 г (мл) продукту враховують по зростанню колоній мезофільних мікроорганізмів на м’ясо-пептонному агарі.
► ХІД РОБОТИ: ◄
Робота виконується на двох заняттях.
Завдання на перше заняття:
1. Підготовка поживного середовища для кількісного обліку мікроорганізмів чашковим методом.
2. Засів поживного середовища | пробами грунту, повітря, води, молока, змивом з рук для визначення відповідного мікробного числа.
1. Визначення мікробного числа грунту
Порядок проведення роботи:
1. Наважку грунту (1 г), суспендують 2 хв в 100 мл стерильної водогінної води. Дають відстоятися частинкам грунту протягом 5-10 хв.
2. З надосадочної рідини відбирають 1 мл і переносять в пробірку, заповнену 9 мл стерильної водогінної води (розведення 1:103).
3. Струшують суспензію, відбирають 1 мл надосадочної рідини і переносять в іншу пробірку з 9 мл води (розведення 1:104).
4. Посів проводять з останньої пробірки: 0,05 мл суспензії переносять в чашку Петрі і заливають заздалегідь розплавленим поживним агаром. Акуратно перемішують. Дають застигнути агару.
5. Чашки перевертають догори дном і інкубують при 37°С 48 г. Підрахунок колоній, що виросли, проводиться на наступному занятті.
2. Визначення мікробного числа повітря
Методи мікробіологічного дослідження повітря підрозділяють на седиментаційні та аспіраційних. Найбільш простим є седиментаційний метод Коха: стерильні чашки Петрі з твердим поживним середовищем відкривають в місцях відбору проб повітря і витримують протягом певного часу (5–30 хв), після чого закривають і термостатують. За кількістю колоній, що виросли, підраховують мікробне число повітря, користуючись правилом Омелянського. Відповідно до цього правила вважають, що на поверхню поживного середовища площею 100 см2 протягом 5 хв осідає стільки мікроорганізмів, скільки їх міститься в 10 л повітря. Кожна мікробна клітина започатковує одну колонію. Знаючи кількість колоній, що виросли, і час експозиції, обчислюють кількість мікробів, які містяться в 1 м3 (1000 л) повітря.
Порядок проведення роботи:
Для визначення мікробної забрудненості повітря розплавляють на водяній бані стерильне середовище (МПА) і заливають в стерильну чашку. Чашку ставлять в місці відбору проб і відкривають на 10 хв. Час витримки відмічають на кришці чашки. Потім чашку з МПА термостатують при 37 °С 48 г, перевернувши догори дном. Підрахунок колоній ведуть на наступному занятті.
3. Визначення мікробного числа води
Мікробне число води – це загальна кількість мікроорганізмів, що міститься в 1 мл води. Для санітарно-мікробіологічного дослідження водогінної води проби беруть з вуличних водорозборів і кранів внутрішніх водопроводів. Крани обпалюють, потім повністю відкривають і спускають воду 10 хв. Потім відбирають проби води з дотриманням вимог асептики, не змочуючи пробки, в кількості не менше 0,5 л. Якщо вода піддавалася хлоруванню, то її збирають в колби, що містять 2 мл 1,5%-ого стерильного розчину тіосульфату натрію.
Порядок проведення роботи:
1 мл водогінної води вносять до порожньої стерильної чашки Петрі, куди потім наливають 10–12 мл розплавленого МПА (45 °С) і ретельно перемішують. Після застигання агару посіви інкубують при 37 °С 24 г.
4. Визначення мікробної забрудненості предметів побуту і рук
Для аналізу мікробної забрудненості столів, устаткування, рушників, халатів, рук персоналу використовують тампонний метод. Для цього готують ватяні тампони, стерилізують їх, занурюють в пробірки з 2 мл стерильної води або ізотонічного розчину хлориду натрію. При цьому тампон не повинен торкатися поверхні рідини. Змочують тампон безпосередньо перед узяттям проб. Для відбору проб з плоских крупних поверхонь (столів) використовують трафарети з дроту, які заздалегідь стерилізують фламбіруванням; потім накладають їх на поверхню стола, проводять змив вологим тампоном з поверхні 100 см2, обмеженої трафаретом. Тампон поміщають в пробірку, додають ще 8 мл рідини і ретельно прополіскують і віджимають тампон.
Загальну мікробну забрудненість визначають, засіваючи 1 мл змиву в глибину розплавленого МПА в чашці Петрі, як це описано для визначення мікробного числа води. Посіви вирощують протягом доби при 37 °С. Підраховують кількість колоній, що виросли, і визначають загальну мікробну забрудненість даного об'єкту. Для виявлення дріжджів і грибів роблять посів на сусло-агар.
Змиви з рук отримують, ретельно протираючи долоні, між пальцями і під нігтями вологим стерильним тампоном. Тампон занурюють в ту ж пробірку, в якій він змочувався, додають ще 8 мл стерильної води.
Порядок проведення роботи:
1. Стерильний тампон помістити в стерильну пробірку з 2 мл стерильної водогінної води. Змочити тампон.
2. Вологим тампоном ретельно протерти руки.
3. Помістити тампон в ту ж пробірку і додати в неї ще 8 мл стерильної води (вихідний змив розведений 1:10).
4. Для приготування розведення 1:100 1 мл вихідного змиву (1:10) поміщають в пробірку і доливають до нього 9 мл стерильної водогінної води.
5. У стерильну чашку Петрі вносять 1 мл розведення 1:100. Заливають в чашку розплавлений і злегка охолоджений МПА. Після застигання агару посів термостатують при 37 °С протягом доби.
6. Підрахунок мікроорганізмів проводять на наступному занятті.