Выделение генов

Как известно, геном ядра клеток высших растений содержит большое количество ДНК. Выделение фрагмента ДНК с известной нуклеотидной последовательностью, составляющий определённый ген, из десятка миллионов подобных - представляет собой непростую задачу.

Существуют несколько способов решения:

1. Химический синтез гена.

Возможен при наличии подробной информации о нуклеотидной последовательности соответствующей ДНК и, как правило, объектом синтеза являются гены, кодирующие относительно небольшие белки (например, соматостатин – 14 аминокислот).

1. Выделение полноразмерных генов из клонированных последовательностей ДНК (кДНК) с помощью зондов, созданных на основе химического синтеза (50 – 180 оснований). кДНК - это структурная часть гена, полученная путем обратной транскрипции с определенной иРНК.

 

При объединении фрагментов ДНК для клонирования в векторе возникает проблема совместимости концов объединяемых фрагментов.

Поэтому у вектора и у фрагмента геномной ДНК – (у лигируемых молекул ДНК) проводят ферментативную модификацию концов путём достраивания липких концов.