Работа 12. Определение активности амилазы крови с помощью метода «сухой химии» в сочетании с рефлометрией.

Под сухой химией понимается процедура, когда реагенты, необходимые для химического анализа, наносятся в определенных пропорциях на бумагу или пленку, высушиваются и стабилизируются. После введения точного объема образца крови, сыворотки или плазмы реагенты вновь активируются и химическая реакция протекает так же, как и в «жидкой» химии. Изменения окраски продуктов реакции регистрируются с помощью отражательного фотометра (рефлектофотометра, рефлотрона). таким образом, для реализации метода сухой химии необходимы два основных компонента системы: тест-полоски и рефлотрон.

Тест-полоски имеют довольно сложное строение. В верхней части полоски находится многослойная структура, причем наружный слой состоит из стекловолокна. Здесь происходит отделение сыворотки крови от форменных элементов. Сыворотка распределяется равномерно и проникает в следующие слои, содержащие химические реагенты. Эти реагенты отделены друг от друга и стабилизированы в сухой форме. Благодаря этому тест-полоски могут храниться до года при комнатной температуре. По мере проникновения сыворотки крови через слои реагентов осуществляется заданная химическая реакция. Измерение интенсивности возникшей окраски осуществляется в рефлотроне и результат представляется в избранных единицах на табло. В нижней части тест-полоски находится магнитная лента. Она содержит информацию для управления рефлотроном: название измеряемого параметра, время отделения плазмы, время протекания реакции, длина волн света для регистрации, факторы пересчета, единицы измерения, калибровка. Весь процесс управления ходом анализа осуществляется микропроцессором рефлотрона.

Принцип: a-амилаза

Индолил-a,D-мальтогептаозид индоксил + глюкоза

a-глюкозидаза

Индоксил + 2-метокси-4-морфолинофенил-диазониумтетрахлороцинкат

красно-фиолетовое окрашивание

Нормальные значения активности в крови, сыворотке, плазме

37 °С	30 °С	25 °С
< 220 Е/л	< 160 Е/л	< 120 Е/л

Исследуемый материал.

Капиллярная кровь, сыворотка или плазма

Ход работы

1. Включить прибор.

2. Вынуть тест-полоску из виалы.

3. Удалить защитную фольгу.

4. Нанести 32 мкл исследуемого образца с помощью пипетки для рефлотрона в центр красной аппликационной зоны тест-полоски “Amylase”(наконечник пипетки не должен соприкасаться с тест-полоской).

5. В течение 15 секунд вставить полоску в рефлотрон (надпись “AMYL” показывает, что полоска правильно вставлена и специфический магнитный код прочитан прибором).

6. Прочитать результат через время, указанное на дисплее прибора (в секундах).

7. Открыть приемное отделение рефлотрона и удалить использованную полоску.