рефераты конспекты курсовые дипломные лекции шпоры

Реферат Курсовая Конспект

Работа 13. Определение активности щелочной и кислой фосфатаз в сыворотке крови по гидролизу b-глицерофосфата (метод Боданского), УИРС.

Работа 13. Определение активности щелочной и кислой фосфатаз в сыворотке крови по гидролизу b-глицерофосфата (метод Боданского), УИРС. - раздел Биотехнологии, Основы биотехнологии Активность Щелочной Фосфатазы В Норме Равна 0,5-1,3 Ммоль/ч×л, А Кислой...

Активность щелочной фосфатазы в норме равна 0,5-1,3 ммоль/ч×л, а кислой фосфатазы – 0,06-0,13 ммоль/ч×л. Принцип определения активности фосфатаз основан на способности ферментов отщеплять неорганический фосфат от b-глицерофосфата. Для определения активности щелочной фосфатазы используют щелочной раствор b-глицерофосфата, для кислой – кислый раствор b-глицерофосфата.

Реактивы и исследуемый материал

1. Щелочной раствор b-глицерофосфата, 5 г/л, рН 8,6. 2. Кислый раствор b-глицерофосфата, 5 г/л, рН 5,0. 3. Раствор молибденовокислого аммония, 25 г/л (в 2,5 н растворе серной кислоты). 4. Раствор трихлоруксусной кислоты, 100 г/л. 5. Рабочий стандартный раствор фосфора (содержит 0,01 мг фосфора в 1 мл). 6. Раствор аскорбиновой кислоты, 10 г/л (в 0,1 н растворе HCI).

Ход работы

В центрифужную пробирку с надписью Пщ внести 1 мл щелочного раствора, в пробирку с надписью Пк - 1 мл кислого раствора b-глицерофосфата и поместить их на 5 мин в термостат при 37 °С для прогревания субстратов. Затем осторожно, избегая образования пузырьков воздуха, в пробирки внести по 0,1 мл сыворотки крови и полученную фермент-субстратную смесь инкубировать в течение 1 ч при 37 °С. Время термостатирования опытных проб использовать для определения содержания неорганического фосфата в контрольных пробах. Для этого в центрифужные пробирки с надписью Кщ и Кк внести соответственно по 1 мл щелочного или кислого раствора b-глицерофосфата, прилить по 1,1 мл раствора трихлоруксусной кислоты, после чего добавить по 0,1 мл той же сыворотки крови, пробы перемешать и через 5 мин центрифугировать в течение 10 мин при 3000 об/мин. Затем отобрать по 1,5 мл центрифугата и перенести в обычные пробирки с соответствующей маркировкой (Кщ и Кк), прибавить по 1 мл молибденового раствора, 1 мл раствора аскорбиновой кислоты, перемешать. Пробы выдерживают 10 мин при комнатной температуре, после чего их колориметрируют при красном светофильтре в кюветах шириной 5 мм. В качестве пробы сравнения используют дистиллированную воду. К опытным пробам после инкубации в термостате добавить по 1,1 мл раствора трихлоруксусной кислоты, перемешать и далее обработать и колориметрировать, как контрольные пробы. Активность щелочной и кислой фосфатаз рассчитывают, используя калибровочный график. Для построения калибровочной кривой готовят следующие растворы.

Реактивы Номера пробирок
 
Рабочий раствор Рн, мл 0,6 1,2 2,4 3,6 4,8 6,0
ТХУ, мл 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5
Вода, мл 5,9 5,3 4,1 2,9 1,7 0,5
Перемешать
Отобрать в другие пробирки 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5
Молибденовый раствор, мл 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0
Аскорбиновая кислота 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0
Содержание Рн (мг) в пробах 0,001 0,002 0,004 0,006 0,008 0,010

Через 10 мин после прибавления аскорбиновой кислоты пробы колориметрировать при красном светофильтре в кювете шириной 5 мм против дистиллированной воды. При построении калибровочной кривой на оси абсцисс откладывать содержание Рн в пробах, а на оси ординат – величины оптической плотности. В качестве единицы масштаба взять 10 мм на 0,001 мг фосфора.

По калибровочной кривой рассчитать число мг Рн в опытных и контрольных пробах.

Активность щелочной фосфатазы = (Пщщ)×1,47×105/31 ммоль/ч×л

Активность кислой фосфатазы = (Пкк) × 1,47×105/31 ммоль/ч×л,

где (Пщщ) или (Пкк) – количество Рн, которое освободилось при действии фосфатазы; 1,47×105 – коэффициент пересчета с 0,068 мл на 1 л сыворотки; 31 – масса 1 ммоля Рн (мг).

– Конец работы –

Эта тема принадлежит разделу:

Основы биотехнологии

Основы биотехнологии.. витебск министерство образования республики беларусь..

Если Вам нужно дополнительный материал на эту тему, или Вы не нашли то, что искали, рекомендуем воспользоваться поиском по нашей базе работ: Работа 13. Определение активности щелочной и кислой фосфатаз в сыворотке крови по гидролизу b-глицерофосфата (метод Боданского), УИРС.

Что будем делать с полученным материалом:

Если этот материал оказался полезным ля Вас, Вы можете сохранить его на свою страничку в социальных сетях:

Все темы данного раздела:

Учебно-методический комплекс для студентов биологического факультета
Издание второе, дополненное и исправленное   Витебск Издательство УО «ВГУ им. П.М.Машерова» 2009   УДК 575

Чиркин А.А.
Введение в биотехнологию. Учебно-методический комплекс для студентов биологического факультета / А.А.Чиркин. – Витебск: Издательство УО «ВГУ им. П.М.Машерова», 2009. – 146 с. &nbs

ОСНОВЫ БИОТЕХНОЛОГИИ
Для специальности 1-31 01 01 – Биология рекомендуется учебная программа № ТД-G.005/тип., составленная доктором медицинских наук профессором Ю.К.Фомичевым, доктором биологических наук профессором В.

Биотехнологические основы культивирования микроорганизмов.
Обобщенная схема промышленного выращивания микроорганизмов с целью получения конечных продуктов представлена на рис 9. Исходная культура (5-10 мл) ↓ Встряхиваемая к

Практикум
Работа № 1. Знакомство с питательными среды для культивирования изолированных клеток и тканей растений. Основные компоненты питательных сред: - макроэлементы (азот, фосфор, калий,

Работа 4. Определение концентрации общего белка в сыворотке (плазме) крови биуретовым методом (набор НТК «Анализ-Х») - УИРС
Значение концентрации общего белка в сыворотке крови практически здоровых людей составляют: у взрослых 65-85 г/л, у детей до 6 лет - 56-85 г/л, у новорожденных - 53-89 г/л. Из колориметрических мет

Работа 5. Колоночная гель-фильтрация.
Для гель-фильтрации используются так называемые молекулярные сита - инертные гидратированные полисахаридные материалы, представляющие собой пористые гранулы. Их получают на основе декстрана (сефаде

Работа 6. Определение термолабильности амилазы слюны.
Вариант 1 Реагенты Опыт 1 Опыт 2 Контроль Слюна 1:10, кап. -

Работа 7. Определение оптимума рН для действия амилазы.
Реагенты Значение рН 6,0 6,4 6,8 7,2 7,6 8,0

Работа 8. Влияние активаторов и ингибиторов на активность амилазы.
Реагенты Контроль Опыт 1 Опыт 2 Слюна 1:10, мл 1,0 1,0 1,0

Работа 9. Специфичность действия ферментов
Приготовить разведение слюны в 5 раз (1 мл слюны + 4 мл воды) Реагенты Опыт 1 Опыт 2 Опыт 3 Опыт 4

Работа 11. Ингибирующее действие хлорид-ионов на дегидрогеназный комплекс картофеля.
Хлорид-ионы ингибируют дегидрогеназный комплекс и срез картофеля остается без изменений, остальные темнеют. Реактивы, исследуемый материал 1. NaCl, крист. 2. NaI, крист. 3. KClO

Работа 12. Определение активности амилазы крови с помощью метода «сухой химии» в сочетании с рефлометрией.
Под сухой химией понимается процедура, когда реагенты, необходимые для химического анализа, наносятся в определенных пропорциях на бумагу или пленку, высушиваются и стабилизируются. После введения

Работа 14. Качественные реакции на витамин А.
Витамин А при взаимодействии с серной кислотой окрашивается в красно-фиолетовый или красно-бурый цвет, при взаимодействии с хлорным железом - в желто-зеленый цвет. Реактивы, исследуемый ма

Работа 15. Количественное определение витамина А в рыбьем жире.
Принцип метода. Метод основан на реакции витамина А с треххлористой сурьмой в присутствии уксусного ангидрида, в результате чего развивается синяя окраска. Интенсивность окраски, прямо пропо

Работа 16. Качественные реакции на витамин Д.
Витамин Д при взаимодействии с анилиновым реактивом при нагревании окрашивается в красный цвет, при взаимодействии с раствором брома в хлороформе приобретает зеленовато-голубую окраску. Ре

Работа 17. Обнаружение эргостерола в дрожжах.
Эргостерол по строению близок к холестерину и поэтому дают характерную для него реакцию с уксусным ангидридом и серной кислотой (синее или зеленое окрашивание). Реактивы, исследуемый матер

Работа 107. Качественная реакция на витамин Е с азотной кислотой.
Принцип метода.Спиртовой раствор витамина Е в присутствии концентрированной азотной кислоты окисляется в хиноидное соединение, окрашенное в красный цвет. Реактивы и

Работа 19. Количественное определение витамина Е.
Ход работы В две пробирки наливают по 2,5 мл 0,1% спиртового раствора витамина Е; добавляют по 0,5 мл 70% раствора азотной кислоты и выдерживают в кипящей водяной бане 3 мин. Пробирки охла

Работа 20. Количественное определение витамина С в хвое, шиповнике, картофеле, луке, молоке, капусте по методу Тильманса.
Принцип метода. Количественное определение аскорбиновой кислоты основано на её способности окисляться 2,6-дихлорфенолиндофенолом в дегидроаскорбиновую кислоту. Определение проводится путём т

Работа 22. Выделение фолиевой кислоты из дрожжей и ее обнаружение.
Принцип: фолиевая кислота хорошо растворима в 0,1 н. растворе NaOH. При экстрагировании фолиевой кислоты из дрожжей и ультрафиолетовом облучении наблюдается интенсивно голубая флюоресценция.

Хотите получать на электронную почту самые свежие новости?
Education Insider Sample
Подпишитесь на Нашу рассылку
Наша политика приватности обеспечивает 100% безопасность и анонимность Ваших E-Mail
Реклама
Соответствующий теме материал
  • Похожее
  • Популярное
  • Облако тегов
  • Здесь
  • Временно
  • Пусто
Теги