Принцип метода. Метод основан на реакции витамина А с треххлористой сурьмой в присутствии уксусного ангидрида, в результате чего развивается синяя окраска. Интенсивность окраски, прямо пропорциональную количеству витамина А в пробе, определяют фотометрически.
Реактивы и исследуемый материал
1. Хлороформ. 2. Уксусный ангидрид. 3. Треххлористая сурьма, 23% раствор.
Ход работы
Навеску рыбьего жира 2,5 г растворяют в хлороформе в мерной колбе на 25 мл. В кювету КФК помещают 0,4 мл хлороформного раствора рыбьего жира, прибавляют 1-2 капли уксусного ангидрида (для предотвращения появления мути) и 4 мл раствора треххлористой сурьмы. Через 10 с фотометрируют при 620 нм против раствора треххлористой сурьмы. Концентрацию витамина А в исследуемом растворе находят по калибровочному графику, на котором каждому значению найденной оптической плотности соответствует определенное содержание витамина А в 0,4 мл раствора. Построение калибровочного графика производится с помощью стандартизованного концентрата витамина А в рыбьем жире. Если содержание витамина А в 1 г концентрата 500 МЕ, то для приготовления первоначального раствора берут навеску 10 г и растворяют в хлороформе в мерной колбе на 50 мл. В 1 мл этого раствора содержится 100 МЕ витамина А. Из этого раствора готовят еще 5-6 разведений с таким расчетом, чтобы в 0,4 мл раствора содержалось от 20 до 70 МЕ витамина А. Это количество (0,4 мл) берут для определения оптической плотности раствора. Полученные данные оптической плотности используют для построения калибровочного графика, где на оси ординат наносят найденное значение оптической плотности для каждого разведения раствора, а на оси абсцисс – содержание витамина А в тех же растворах. Содержание витамина А в 1 г рыбьего жира вычисляют по формуле: Х=А´25/0,4´2,5, где Х – содержание витамина А в 1 г рыбьего жира в МЕ, 0,4 – количество раствора в мл, взятое для определения, 25 – общий объем исследуемого раствора в мл, 2,5 – навеска рыбьего жира в г.