рефераты конспекты курсовые дипломные лекции шпоры

Реферат Курсовая Конспект

Извлечение и подготовка эмбрионов к пересадке

Работа сделанна в 2000 году

Извлечение и подготовка эмбрионов к пересадке - Лекция, раздел Сельское хозяйство, - 2000 год - Методы диагностики и профилактики микробной контаминации при трансплантации эмбрионов Извлечение И Подготовка Эмбрионов К Пересадке. Извлечение Эмбрионов Проводили...

Извлечение и подготовка эмбрионов к пересадке. Извлечение эмбрионов проводили на 7-8 день полового цикла нехирургическим методом. Перед операцией донора готовили по методике, описанной в разделе 1.2, затем эпидурально вводили 5-7 мл 2 -го новокаина в зависимости от веса животного.

Беспокойным добавочно вводили 0,3-0,5 мл ромпуна. Ректально методом пальпации оценивали состояние полового аппарата, проводили подсчеты желтых тел и фолликулов. Для вымывания эмбрионов использовали катетеры различных конструкций. Промывная жидкость подавалась через закрытую систему самотеком из емкости, расположенной в верхнем гнезде штатива над донором. Промывание маточного рога проводили 8-10 раз, вводя по 60-50 мл промывной среды. На вымывание одного рога расходовали 450-500 мл модифицированной среды Дюльбекко с добавлением 1 инактивированной сыворотки крови крупного рогатого скота.

В научно-производственных опытах по санации промывных буферных сред добавляли комплекс антибиотиков гентамицин-ампициллин в концентрациях 12 мкг мл и 100 Ед мл, соответственно. Бактерицидную дозу санирующих препаратов испытывали на штаммах микроорганизмов, как монокультуре, так и в ассоциации, методом серийных разведении. Безвредность санирующих препаратов для эмбрионов определяли методом культивирования эмбрионов крупного рогатого скота в средах содержащих различные дозы испытуемых препаратов.

Эффективность применения санирующих препаратов учитывали по результатам приживляемости эмбрионов. Смыв отстаивали 15-20мин. при температуре 37 С в термостате. Надосадочную жидкость аспирировали с помощью сифона. Осадочную среду разливали в стерильные чашки Петри с расчерченным на полоски дном. Поиск зародышей производили под стереоскопическим микроскопом МБС-9. Обнаруженные эмбрионы переносили стерильным микрошприцем на малую чашку Петри диаметром 40мм. Жизнеспособность эмбрионов определяли по общепринятой методике оценки морфологического состояния эмбриона В. Shea et al 1976 , учитывая их компактность, симметричность, плотность.

Инструкция по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота, 1987 . В сравнительных опытах по многократному отмыванию эмбрионов использовали буферные среды, приготовленные за 10-15мин. до начала поиска эмбрионов.

Отмывная среда для эмбрионов состояла из стерильного буфера Дюльбекко с добавлением 15-20 инактивированной фетальной сыворотки, которую в стерильных условиях расфасовывали в полиэтиленовые ампулы по 2 мл. В другой емкости готовили такую же среду с добавлением комплекса антибиотиков гентамицин-ампициллин 12 мкг мл и 100 Ед мл. При отмывании использовали микрошприц и микропипетку для захвата эмбрионов с минимальным объемом среды. Устройство применяли с целью захвата, переноса и микробной деконтаминации эмбрионов.

Культивирование эмбрионов проводили при температуре 37,5 С без доступа кислорода в модифицированной среде Дюльбекко, содержащей 20 фетальной сыворотки крупного рогатого скота. В среду для культивирования подопытных эмбрионов вносили комплекс антибиотиков гентамицин-ампициллин 12 мкг мл и 100 Ед мл, в первом контроле использовали пенициллин 100 Ед мл и стрептомицин 50 Ед мл, во втором контроле для культивирования эмбрионов использовали среду без антибиотиков.

Эмбрионы в средах с антибиотиками выдерживали 2 часа. Затем меняли среду и культивировали 72 часа. Морфологическое состояние эмбрионов оценивали через 2, 24, 48 и 72 часа. 4.2.4 Влияние микробного фактора на приживляемость эмбрионовПри проведении опытов по определению влияния микробного фактора на приживляемость эмбрионов использовали чистые культуры микроорганизмов, ранее выделенные из половых путей коров-доноров и телок-реципиентов. Инокуляцию отмытых и подготовленных к пересадке эмбрионов проводили чистыми суточными культурами. Чистые культуры Stapha и Ecoli выделяли методом Коха. Принцип метода заключается в получении чистой культуры из колонии, рост которой считали результатом развития одной клетки.

Для выделения чистой культуры производили высев на поверхность агаровой среды из накопительной культуры с ее разведения. Разведение делали с таким расчетом, чтобы получить на поверхности агаровой среды изолированные колонии. Для посева на поверхность плотной агаровой среды наносили каплю этой культуры, которую осторожно распределяли по всей поверхности стерильным шпателем с последующим переносом ее на поверхность агара последовательно во вторую, третью и четвертую чашки.

В первых двух чашках после инкубации при температуре 37 С для Staph. aureus и 43 С для E.coli наблюдали сплошной рост микроорганизмов, тогда как в последующих чашках отмечали рост изолированных колоний. Одну из колоний отбирали стерильной петлей и производили высевы в пробирки с МПБ и на поверхность скошенного агара.

Идентификацию E.coli проводили путем высева на среду Булира и Эндо, a Staph. aureus на МПБ и МПА с добавлением 1 глюкозы. Чистые культуры Staphaureus и Е. coli в разведении 1 10 контаминировали в среды с эмбрионами. Для получения определенного количества микроорганизмов в 1 мл среды необходимо было получить суспензию этих культур и приготовить их разведение. Чаще всего для инокуляции используют чистые суточные культуры микроорганизмов в разведении 1 10 - 1 10. Для приготовления таких разведении, стерильный физиологический раствор разливали по 9 мл в стерильные сухие пробирки.

Затем 1 мл исходной суспензии, взятой стерильной пипеткой, переносили в первую пробирку с 9 мл стерильного физиологического раствора - получали первое разведение 1 10. Затем этой же пипеткой брали 1 мл полученного разведения и переносили его во вторую пробирку. Получали второе разведение Таким же образом готовили и последующие разведения. В эксперименте по определению влияния микробного факторана приживляемость эмбрионов было взято две группы животных-аналогов по 20 голов в каждой.

Телкам-реципиентам опытных групп пересаживали эмбрионы, инокулированные чистыми культурами микроорганизмов в вышеуказанных разведениях. 10 животным трансплантировали эмбрионы, инфицированные Staph. aureus, другим 10 - эмбрионы с внесенной культурой E.coli, 20 контрольным телкам пересаживали эмбрионы, отмытые в пяти чашках стерильными буферными средами, без добавления микроорганизмов.

В природе отмечено, что микроорганизмы в ассоциациях могут быть синергистами либо антагонистами. Поэтому нами проведены исследования по определению антагонизма микроорганизмов, выделенных из половых путей самок. В этих опытах применяли метод посева испытуемых микробов на чашках Петри с МПА радиальными штрихами к предварительно выращенным колониям предполагаемого антагониста по методике В.В.Аврех и А.Ф.Зак, описанной в справочнике И.О.Биргера 1973 . В экспериментах по определению бактериальной загрязненности половых путей доноров и реципиентов нами выделено в основном 4 вида бактерий Bac.subtilis, E.coli, Staph.aureus и Ps.aeruginosa.

Перечисленные виды микроорганизмов относятся к группе возбудителей специфических половых инфекций. Известно, что в определенных условиях резистентность организма значительно ослабевает и нормальный количественный и качественный состав микрофлоры изменяется или активизируется деятельность имеющихся микроорганизмов.

Попадание микробов в глубокие отделы полового аппарата самки в природных условиях при естественном спаривании явление не столь уж редкое. Именно вследствие этого возникла у самок активная защитная реакция в эстральном периоде. И у самих зародышей в процессе эволюции выработался защитный механизм, особенно необходимый на ранних стадиях развития, когда еще не существует плацента с ее барьерной функцией. Это подтверждено опытами Б.П.Токина 1956 . 4.3

– Конец работы –

Эта тема принадлежит разделу:

Методы диагностики и профилактики микробной контаминации при трансплантации эмбрионов

Одним из главных условий успешного применения метода трансплантации эмбрионов в животноводстве является асептичность проводимых операций A. Brand… При манипулировании с эмбрионами вне организма нельзя допускать их… Многие авторы утверждают, что как яйцеклетка, так и эмбрион с интактной зоной пеллюцида надежно защищены от микробного…

Если Вам нужно дополнительный материал на эту тему, или Вы не нашли то, что искали, рекомендуем воспользоваться поиском по нашей базе работ: Извлечение и подготовка эмбрионов к пересадке

Что будем делать с полученным материалом:

Если этот материал оказался полезным ля Вас, Вы можете сохранить его на свою страничку в социальных сетях:

Все темы данного раздела:

Состояние и перспективы применения метода трансплантации эмбрионов
Состояние и перспективы применения метода трансплантации эмбрионов. Трансплантация эмбрионов женским особям сравнима по возможностям с техникой искусственного осеменения, позволяющей полнее использ

Чувствительность матки к инфекциям в разные периоды полового цикла
Чувствительность матки к инфекциям в разные периоды полового цикла. Здоровый организм млекопитающих имеет целую систему защитных приспособлений, поэтому деятельность микроорганизмов- сапрофитов огр

Предупреждение заноса инфекции в матку при извлечении и пересадке эмбрионов
Предупреждение заноса инфекции в матку при извлечении и пересадке эмбрионов. В настоящее время во многих странах ведутся интенсивные работы по разработке оптимальных способов получения и пересадке

Цель и задачи
Цель и задачи. Целью нашей работы была разработка методов профилактики и санитарного контроля технологических процессов при трансплантации эмбрионов у крупного рогатого скота. Для достижения

Материалы и методика исследований
Материалы и методика исследований. Все исследования по данной работе проводились в лаборатории трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных Харьковского биотехнологического центра Украинс

Подготовка доноров и реципиентов
Подготовка доноров и реципиентов. Подготовку донора начинали в манеже с чистки и мытья кожного покрова и конечностей. Затем животное переводили в операционную, фиксировали в станке, прямую кишку ос

Анализ экономической деятельности предприятия
Анализ экономической деятельности предприятия. Таблица 4.3.1. Анализ фонда заработной платы Харьковского биотехнологического центра Должность Заработная плата, грн. Всего за месяц, грн. Всего за го

Характеристика предприятия
Характеристика предприятия. Харьковский биотехнологический центр расположен на восточной окраине города Харькова на территории ПО Кулиничи. В центре имеются административный и лабораторный корпус,

Разработка мер предупреждения микробной контаминации эмбрионов на технологических этапах их подготовки
Разработка мер предупреждения микробной контаминации эмбрионов на технологических этапах их подготовки. При изучении бактериальной загрязненности половых путей реципиентов в разные фазы полового ци

Обсуждение результатов собственных исследований
Обсуждение результатов собственных исследований. Как известно, низкий уровень воспроизводства у самок и длительный интервал времени между поколениями, в среднем 6-7 лет у крупного рогатого скота, о

Организация охраны труда
Организация охраны труда. В соответствии с Законом Украины об охране труда от 14 октября 1992 года, утвержденного Верховным Советом Украины, руководители хозяйств обязаны разработать совместно с пр

Производственная санитария
Производственная санитария. Помещения ХБТЦ построено согласно СНиПа II 97-76. Генеральные планы сельскохозяйственных предприятий и СНиПа 2.09.04 87. Административные и бытовые здания. Микрок

Хотите получать на электронную почту самые свежие новости?
Education Insider Sample
Подпишитесь на Нашу рассылку
Наша политика приватности обеспечивает 100% безопасность и анонимность Ваших E-Mail
Реклама
Соответствующий теме материал
  • Похожее
  • Популярное
  • Облако тегов
  • Здесь
  • Временно
  • Пусто
Теги