Количественное определение балантидий в 1 мл материала

 

Число баланти-дий в 0,02 мл	Объем материала, взятого для исследования, мл
0,1	0,2	0,3	0,4	0,5	0,6	0,7	0,8	0,9	1,0

 

ДИАГНОСТИКА ГЕЛЬМИНТОЗОВ ЖИВОТНЫХ

Диагноз на гельминтозы ставят на основании комплекса исследований — эпизоотологических, клинических, патологоанатомических и др. При этом проводят исследование крови, экстирпированных кусочков мышц, связок, сухожилий, кожи, проб фекалий, мочи, содержимого и соскобов слизистой желудка и т. д. Исследуют их с целью обнаружения яиц, личинок или взрослых гельминтов.

Необходимо знать, что по количеству яиц или личинок гельминтов в исследуемой пробе материала или по отсутствию их не всегда можно точно судить об экстенсивности и интенсивности инвазии. Например, нет четкой зависимости между количеством яиц и личинок стронгилят в пробах фекалий и взрослых нематод в желудочно-кишечном тракте и легких жвачных (J. Р. Rаunaud, 1974). Гельминтоовоскопическое исследование фекалий и послеубойный осмотр печени коров на фасциолез совпадают лишь у 50 % обследованных животных (Г. А. Котельников, 1984).

Можно привести много примеров, когда у одних животных обнаруживают мало яиц и личинок в фекалиях и много взрослых гельминтов в организме, и наоборот, что объясняется рядом причин — возрастом животных, их физиологическим состоянием, кормлением, содержанием, сезоном года и т. д.

Прижизненная диагностика гельминтозов

Прижизненную диагностику гельминтозов проводят с применением эпизоотологических, клинических, лабораторных и других методов исследований. Эпизоотологическими исследованиями определяется степень распространения паразитозов, возрастные и сезонные особенности проявления их, уровень экстенс- и интенсинвазированности животных гельминтами. Клиническим обследованием животных определяют форму течения гельминтозов (клиническое или субклиническое), острое, подострое или хроническое проявление и т. д. Лабораторные методы предполагают использование гельминтокопроскопических методов исследований, которые направлены на обнаружение в фекалиях животных яиц гельминтов (гельминтоовоскопия), их личинок (гельминтолярвоскопия), половозрелых паразитов или их фрагментов (гельминтоскопия).

 

Оборудование для гельминтокопроскопических

исследований

1. Микроскопы биологические (МБИ) или стереоскопические (МБС), лупы. 2. Чашки Петри, предметные стекла, часовые стекла, стаканчики с диаметром вверху 4— 5 см, стеклянные палочки, воронки, глазные пипетки, центрифужные пробирки, кюветы, штативы, ведра. 3. Центрифуги лабораторные (ОПн-3 и др.) с частотой вращения пробиркодержателя 1000, 1500 и 3000 об/мин. 4. Денсиметры. 5. Аппарат Бермана. 6. Фильтрационные ситечки, металлические петли с диаметром кольца 8— 10 мм. 7. Газовые горелки или спиртовки. 8. Флотационные растворы, молочная кислота, глицерин, гидрофильный целлофан.

 

Флотационные растворы и способы их применения

Раствор нитрата аммония (NH₄NO₃) — на 1 л горячей воды добавляют 1,5 кг гранулированной или обычной аммиачной селитры. Плотность раствора нитрата аммония должна быть 1,5.

Раствор нитрата натрия (NaNОз) готовят путем добавления на 1 л воды 1 кг азотно-кислого натрия и плотность доводят до 1,38—1,40.

Раствор сульфата цинка (ZnSO ₄ ·7H₂O) готовят с плотностью 1,24 путем добавления к 1 л воды 0,4 кг серно-кислого цинка.

Раствор гипосульфита натрия (Na₂S₂O₃ ·5H₂O) с плотностью 1,4 готовят путем добавления к 1 л воды 1,75 кг вещества.

Раствор хлористого натрия (NаСl) применяют с плотностью 1,18—1,20. Для этого в емкость с кипящей водой добавляют небольшими порциями соль из расчета 0,4 кг ее на 1 л воды. Для приготовления насыщенного раствора на дне емкости должны оставаться кристаллы соли.

Раствор сульфата магния (МgSO₄) с плотностью 1,26—1,28 готовят путем добавления на 1 л воды 0,92 кг соли.

Взятие и доставка в лабораторию проб фекалий животных

Пробы фекалий берут рукой, одетой в тонкую резиновую перчатку, из прямой кишки животных. Допускается отбор проб из только что выделившихся фекалий при испражнении животных. Однако надо следить, чтобы пробы отбирались из верхней части экскрементов, не соприкасавшихся с полом или землей. У мелких животных пробы фекалий берут указательным и средним пальцами. Масса пробы должна быть не менее 8—10 г. После этого тщательно моют руки с мылом.

При обследовании животных на гельминтозы пробы берут от 10 % поголовья, но не менее чем от 25-30 голов.

На отобранные пробы составляется опись и сопроводительное письмо по установленной форме и они отправляются в ветеринарную лабораторию для исследований. Пробы фекалий в ветеринарную лабораторию необходимо доставлять в целлофановых мешочках, в стеклянных банках или завернутыми в пергаментную бумагу. Они должны быть не более как суточной давности, а при исследовании на диктиокаулез и стронгилоидоз - не более 3-4-часовой давности.

Если нет возможности своевременно доставить пробы в лабораторию для исследований, то их консервируют. Для этой цели применяют физические и химические методы консервации.

Из физических методов наиболее простым является воздействие пониженной температуры. Для этой цели используют холодильник, в котором при температуре +2-4°С развитие личинок гельминтов задерживается.

Для консервирования с помощью химических методов применяют различные средства.

1. Жидкость Барбагалло (смесь 3%-ного формалина и физиологического раствора). Помещение проб фекалий в эту жидкость позволяет сохранить их до 2 недель.

2. Смесь формалина (5 мл), глицерина (5 мл) и воды (100 мл).

3. Смесь 0,2%-ного азотно-кислого натрия (1900 мл), 250 мл раствора Люголя, 300 мл формалина и 25 мл глицерина.

4. Растворы различных моющих средств. Применяют 1%-ный раствор гранулированного порошка «Лотос» (соотношение с фекалиями должно быть 5:1), 1,5%-ный порошок «Экстра» и др. В таких растворах яйца гельминтов сохраняются до 2 недель (Г. А. Котельников, 1984).

ГЕЛЬМИНТООВОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ

ГЕЛЬМИНТОЗОВ

Гельминтоовоскопия — это группа методов исследований, основанных на разнице удельной массы яиц гельминтов и жидкой среды. При использовании гельминтоовоскопии применяют флотационные или седиментационные способы, или их комбинации.

В процессе гельминтоовоскопии важным является соблюдение определенных стандартов. Считается, что на результаты исследования (независимо от его метода) влияют: величина массы пробы фекалий, время флотации или седиментации, размер ячеек фильтрационной сетки, диаметр кольца петли, форма, высота и объем стаканчиков и другие факторы (Г. А. Котельников, В. М. Хренов,1984).

В связи с этим во Всероссийском институте гельминтологии им. академика К.И. Скрябина отработаны параметры, соблюдение которых позволяет получить наиболее объективные результаты. Вот перечень некоторых из них.

1. Масса пробы фекалий при применении методов флотации, седиментации или их комбинаций должна составлять 3 г.

2. Соотношение массы фекалий к раствору должно быть 3 :50.

3. Лучшие результаты исследований получают при применении раствора аммиачной селитры (плотность 1,3) через 10—15 мин от начала флотации.

4. Более точные результаты исследований при флотации получают с использованием стеклянных мензурок объемом 50 мл, с применением проволочной петли для снятия яиц с поверхности раствора с диаметром кольца 8—10 мм при исследовании не менее 3 капель поверхности взвеси пробы.

Методы флотации

Метод Ф. Фюллеборна — один из наиболее распространенных методов диагностики гельминтозов. Он заключается в том, что в стакане емкостью 200 мл размешивают 8—10 г свежих фекалий животных с 20-кратным объемом насыщенного раствора хлорида натрия. После тщательного размешивания взвесь фильтруют через металлическое или капроновое ситечко (можно через марлю) в другой чистый стакан емкостью 100 мл и оставляют на 45—60 мин. Затем проволочной петлей с поверхности взвеси стакана берут 3—6 капель н наносят на хорошо обезжиренное предметное стекло, покрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. После каждого исследования стаканы, стекла и стеклянные палочки моют, стекла обезжиривают, а металлические петли обжигают на пламени спиртовки или газовой горелки, что предупреждает перенос яиц паразитов из одной пробы в другую.

В связи с тем, что плотность насыщенного раствора поваренной соли составляет 1,18—1,20, этим методом выделяется только часть яиц нематод, так как плотность яиц трихоцефал составляет 1,16—1,22, неоплодотворенных яиц аскарид— 1,26.

Метод флотации с аммиачной селитрой по Г. А. Котельникову и В. М. Хренову — один из наиболее эффективных методов диагностики аскаридатозов, трихоцефалезов, стронгилятозов, мониезиозов, стронгилоидозов, эймериозов и других паразитозов сельскохозяйственных и домашних животных.

Суть метода состоит в том, что пробу фекалий массой 3 г кладут в стаканчик, добавляют раствор аммиачной селитры плотностью 1,3 и тщательно размешивают стеклянной палочкой. Затем раствор соли порциями доливают до 50 мл. Полученную взвесь фильтруют через металлическое или капроновое ситечко в другой стаканчик и дают отстояться в течение 10 мин. При диагностике стронгилятозов достаточно, чтобы взвесь отстоялась в течение 3—5 мин. После этого металлической петлей с поверхности взвеси снимают 3—6 капель с разных мест и переносят их на предметное стекло. Исследование проводят при малом увеличении микроскопа сразу же после нанесения капель на предметное стекло, так как со временем в каплях образуются кристаллы аммиачной селитры, что затрудняет просмотр препарата.

Метод флотации с аммиачной селитрой и с центрифугированием нашел широкое применение в научной и практической работе ветеринарных специалистов Беларуси. Он отличается высокой эффективностью при диагностике ряда цестодозов, аскаридатозов, стронгилятозов, эймериозов и других паразитозов животных.

Пробу фекалий массой 3 г в стаканчике размешивают с 50 мл раствора аммиачной селитры плотностью 1,3. Полученную взвесь фильтруют через металлическое или капроновое ситечко с диаметром ячеек 0,5х0,5 мм в пробирку и центрифугируют 2 мин со скоростью 1500 об/мин. Затем металлической петлей с поверхности взвеси в пробирке снимают 3—6 капель и микроскопируют.

Поверхностный слой в центрифужной пробирке можно снять и таким способом. Если пробирка заполнена взвесью до краев, ее покрывают покровным стеклом, чтобы поверхность взвеси в пробирке прикоснулась к предметному стеклу. Через несколько минут предметное стекло снимают и микроскопируют.

Метод флотации с применением натриевой селитрысчитается высокоэффективным при применении раствора с плотностью 1,38—1,40 для диагностики аскаридатозов, стронгилятозов, трихоцефалезов, стронгилоидозов, эймериозов и других паразитозов.

Технически исследования проводятся так же, как и методом флотации с применением аммиачной селитры. Капли с поверхности стаканчика или центрифужной пробирки можно снимать через 8—10 мин для проведения исследований.

Метод Дарлинга состоит в том, что берут пробу свежих фекалий массой 5 г, смешивают в стакане с водой в соотношении 1 : 10, через ситечко процеживают в пробирку, центрифугируют 2 мин при скорости 1500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют в равных частях глицерин и насыщенный раствор хлористого натрия. Чистой стеклянной палочкой взвесь тщательно размешивают и повторно центрифугируют. При наличии в пробе фекалий яиц гельминтов они всплывают на поверхность жидкости в центрифужной пробирке. Проволочной петлей берут 3—6 капель с поверхности взвеси, наносят на предметное стекло и микроскопируют.

Метод И. А. Щербовича предполагает в качестве флотационного раствора применять насыщенный раствор сульфата магния. Пробу фекалий из 3—5 г помещают в стаканчик и размешивают в воде в соотношении 1:10,отстаивают 5 мин, сливают, оставляя 10 мл осадка. Взвесь фильтруют в пробирку, центрифугируют в течение 2 минут со скоростью 1500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют насыщенный раствор сульфата магния и повторно центрифугируют. После этого с поверхностного слоя жидкости в пробирке проволочной петлей снимают 3—6 капель, помещают на предметное стекло и микроскопируют. Диагностируют аскаридатозы, стронгилятозы, эймериозы и другие паразитозы.

Метод флотации с использованием гипосульфита натрия с плотностью 1,4 в обычном исполнении (как и с аммиачной селитрой) применяется для диагностики ряда нематодозов жвачных и свиней, эймериозов. Время флотации 10 мин.

Метод В. Н. Трача предназначен для количественного подсчета яиц гельминтов. Для этого пробу фекалий (крупного рогатого скота и свиней — 5 г, мелких жвачных — 2,5 г) помещают в стаканчик диаметром 5 см и емкостью 100 мл. Периодически помешивая, в стаканчик наливают раствор аммиачной селитры плотностью 1,3. Взвесь отстаивают и через 45 мин с ее поверхности металлической петлей диаметром 5 мм берут (с центра и периферии стаканчика) 5 капель, переносят на предметное стекло и микроскопируют. Подсчитывают все яйца гельминтов в 5 каплях взвеси. Затем определяют количество яиц паразитов в одной капле. Для определения количества яиц в пробе площадь поверхности стаканчика делят на площадь петли и умножают на количество яиц в одной капле. Полученное число делят на массу фекалий в пробе и определяют количество яиц паразитов в 1 г фекалий.

Методы седиментации

Эти методы основаны на принципе осаждения взвешенных яиц гельминтов, промывания осадка и его исследования.

Метод последовательных промываний состоит в том, что 3 г свежих фекалий кладут в стаканчик (100 мл) и тщательно размешивают с водой, доводя объем до 50 мл. Полученную смесь фильтруют через металлическое или капроновое ситечко, отстаивают в течение 10 мин. Надосадочную жидкость осторожно сливают, оставляя в стакане 3—5 мл осадка и к нему добавляют опять 50— 70 мл воды, снова отстаивают и сливают надосадочную жидкость. Так повторяют несколько раз, пока надосадочная жидкость не станет прозрачной. Затем ее сливают, осадок выливают на предметное стекло (или чашку Петри) и микроскопируют.

Этим методом можно диагностировать фасциолез, парамфистоматидозы, дикроцелиоз и другие гельминтозы.

Флотационно-седиментационный метод Н. В. Демидова применяют для диагностики фасциолеза. Для этого от крупного рогатого скота берут пробу фекалий массой 5 г (от овец - 3 г), помещают ее в стакан емкостью 200 мл, при постоянном помешивании доливают 200 мл насыщенного раствора хлористого натрия и отстаивают 20 мин. Металлической сеточкой удаляют с поверхности взвеси крупные частицы. Надосадочную жидкость сливают или отсасывают спринцовкой, оставляя на дне 25-30 мл ее. Затем оставшийся осадок размешивают стеклянной палочкой, фильтруют в чистый стакан через металлическое сито или марлю и отстаивают 5 мин. После этого надосадочную жидкость отсасывают спринцовкой, оставшиеся 15-20 мл осадка переливают в конические стаканы, отстаивают 5 минут, надосадочную жидкость сливают и осадок опять промывают. Так повторяют несколько раз, потом осадок помещают на предметное стекло и микроскопируют.

Метод седиментации с целлофановыми пленками по Г. А. Котельникову и В. М. Хренову. Вначале заготовляют целлофановые пленки. Для этого из гидрофильного целлофана толщиной 22 мкм нарезают прямоугольные кусочки размером 2х3 см и помещают их на 24 ч в чашку Петри, содержащую 50%-ный раствор молочной кислоты (можно глицерина). На 500 целлофановых пленок необходимо иметь 100 мл раствора молочной кислоты.

После подготовки целлофановых пленок берут пробу фекалий массой 2 г и размешивают их в стаканчике с небольшим количеством воды. Взвесь фильтруют через металлическое ситечко в другой чистый стакан емкостью 50 мл, отстаивают в течение 5 мин, сливают надосадочную жидкость, а к осадку добавляют 35-40 мл водопроводной воды, опять отстаивают 5 мин, надосадочную жидкость сливают, осадок переносят на предметное стекло и покрывают целлофановой пленкой. Через 8-10 минут проводят микроскопирование препарата. Метод применяется для диагностики фасциолеза, парамфистоматидозов, аскаридатозов, трихоцефалезов и других паразитозов животных.

Метод А. Ю. Вишняускаса применяется для диагностики фасциолеза, парамфистоматидозов, трихоцефалезов, мониезиоза и стронгилятозов желудочно-кишечного тракта.

Суть метода состоит в том, что берут 3 г фекалий крупного рогатого скота (или 1 г фекалий мелких жвачных), помещают в ступку, добавляют 45-50 мл воды и размешивают. Полученную взвесь фильтруют через металлическое или капроновое сито в мерный стакан или мензурку емкостью 100 мл. Ступку и сито прополаскивают водой и доводят объем взвеси до 100 мл, отстаивают 5 мин. Затем верхний слой осторожно сливают (или отсасывают с помощью груши) с таким расчетом, чтобы на дне стакана осталось 20 мл взвеси с осадком. Осадок аналогичным образом еще раз промывают водой, отстаивают и надосадочную жидкость сливают, оставляя в стакане 10 мл осадка с жидкостью. Для дальнейшего исследования необходимо иметь центрифужные пробирки (10 мл) с шлифованными краями. В такую пробирку наливают оставшиеся в стакане 10 мл жидкости с осадком и центрифугируют 1-2 минуты со скоростью 1500 об/мин. Затем верхний слой жидкости сливают, а к осадку добавляют раствор сульфата цинка (ZnSO₄ ·7H₂O) с плотностью 1,24. Мениск жидкости должен быть выше краев центрифужной пробирки. После этого центрифужную пробирку покрывают покровным стеклом таким образом, чтобы жидкость полностью с ним соприкасалась. Затем центрифугируют в течение 0,5-1 минут со скоростью 1500 об/мин. Всплывшие при этом яйца гельминтов прилипают к покровному стеклу, которое снимают с пробирки, помещают на предметное стекло и микроскопируют.

Метод Я. Д. Никольского состоит в том, что в стаканчик емкостью 100 мл наливают 20 мл водопроводной воды и помещают туда 8—10 г фекалий овец. Если в стаканчиках свежие фекалии, их встряхивают через 5 мин, если подсохшие - через 15 минут. Вслед за этим жидкость из стаканчиков сливают в серологические пробирки, отстаивают ее в течение 2 часов, а фекалии выбрасывают. Затем жидкость из пробирок отсасывают грушей с длинным наконечником, а осадок наносят на стекло и микроскопируют. Этот метод применяют для диагностики мониезиоза овец.

Метод С. Ф. Пауликони применяют для диагностики фасциолеза. В принципе это метод последовательных промываний, при котором 5 г фекалий крупного рогатого скота помещают в конусовидной формы цилиндр объемом 250 мл и диаметром в нижней части 3 см. К пробе фекалий при постоянном помешивании добавляют 200 мл водопроводной воды и отстаивают 5 минут. Промывание повторяют еще три раза, причем второй, третий и четвертый периоды отстаивания взвеси длятся соответственно 5, 4 и 3 мин. Жидкость из цилиндра отсасывают спринцовкой, оставляя на дне 0,5 см осадка, который после промывания помещают на предметное стекло (желательно градуированное на квадраты) и подсчитывают количество яиц фасциол для определения интенсивности

инвазии. При этом используют формулу:

 

где а - количество осадка, мл; б — количество обнаруженных яиц фасциол, шт.; в—количество взятых для исследования фекалий, мл; г — количество исследованного осадка, мл; х—число яиц фасциол в 1 мл фекалий.

Комбинированный метод с раствором аммиачной селитры по Г. А. Котельникову и В. М. Хренову состоит в том, что берут пробу фекалий массой 3 г, помещают в стаканчики емкостью 50 мл и хорошо размешивают с водой. Полученную взвесь фильтруют в стаканчик, отстаивают, сливают, а осадок в количестве 10 мл помещают в пробирки и центрифугируют 2 минуты со скоростью 1500 об/мин. После удаления надосадочной жидкости к осадку добавляют раствор аммиачной селитры, размешивают стеклянной палочкой (после каждой пробы ее надо тщательно промывать) и повторно центрифугируют в течение 2 мин при указанной скорости. После этого с поверхности жидкости пробирки металлической петлей снимают 3-6 капель взвеси, помещают их на обезжиренное предметное стекло и микроскопируют. Оставлять предметное стекло с каплями взвеси на какое-либо время не следует, так как аммиачная селитра быстро образует кристаллы, что мешает просматривать препарат.

Этот метод эффективен для диагностики аскаридатозов, трихоцефалезов, метастронгилеза, стронгилоидозов, стронгилятозов желудочно-кишечного тракта, тениидозов и эймериозов.

Овоскопия нативных препаратов по К. Като. Перед проведением диагностических исследований готовят целлофановые полоски размером 8,2 см². Их готовят из гидрофильного целлофана путем погружения в специальную смесь следующего состава: к 500 мл 6%-ного раствора карболовой кислоты добавляют 6 мл 3%-ного водного раствора малахитовой зелени и 500 мл глицерина. На 1000 целлофановых пленок расходуется 200 мл указанной смеси. Срок подготовки полосок составляет 24 ч.

Суть метода К. Като состоит в том, что на обезжиренное предметное стекло наносят 0,1 г свежих фекалий, покрывают целлофановой полоской и придавливают. Препарат микроскопируют в течение часа после приготовления, а в теплое время года через 30—40 минут. Методику К. Като можно применять для диагностики аскаридиоза, гетеракидоза и капилляриоза птиц. Эффективность ее при гельминтозах свиней ниже, чем метода флотации. Для диагностики гельминтозов жвачных ее применять нецелесообразно (Г. А. Котельников, В. М. Хренов, 1984).

Метод Столла. Он заключается в том, что в градуированный цилиндр наливают 0,56 мл раствора едкого натрия, который готовят путем добавления к 1 л воды 4 г щелочи. Затем в цилиндр вносят 4 см³ свежих фекалий и 10 стеклянных дробинок диаметром 3 мм. Цилиндр закрывают пробкой, взбалтывают в течение 2 мин, а затем сразу же отбирают 0,15 мл взвеси (в которой содержится 0,01 см³ фекалий) и помещают на предметное стекло в виде двух капель. Их покрывают стеклами и подсчитывают под микроскопом количество яиц в обеих каплях и умножают на 100. Полученное число определяет количество яиц гельминтов в 1 см³ фекалий.

 

 

ГЕЛЬМИНТОЛЯРВОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

ДИАГНОСТИКИ ГЕЛЬМИНТОЗОВ

Гельминтолярвоскопические методы диагностики применяются для обнаружения в исследуемых объектах (фекалиях, почве, траве, измельченных органах и тканях и др.) личинок нематод.Их применяют для диагностики диктиокаулезов, стронгилоидозов, протостронгилидозов и других гельминтозов животных.

Метод Бермана наиболее часто используют для диагностики диктиокаулезов, стронгилоидозов и других нематодозов животных. Он прост по технике постановки и состоит в том, что пробы свежих фекалий помещают завернутыми в марлю или на металлическую сетку в воронки специально оборудованного аппарата Бермана, в которые до этого наливают воду комнатной температуры. Фекалии мелких жвачных оставляют в воронках на 4-6 ч, крупного рогатого скота и лошадей—на 10-12 ч. За этот период личинки гельминтов выходят из фекалий и оседают на дне пробирок, соединенных с воронкой резиновой трубочкой. По истечении указанного срока пробирки осторожно отделяют от резиновой трубки, жидкость в пробирке аккуратно сливают или отсасывают пипеткой, а осадок помещают на предметное стекло и микроскопируют.

Метод Вайда используется для диагностики диктиокаулеза, мюллериоза и других нематодозов мелких жвачных. Для этой цели на часовое стекло (можно в чашку Петри) помещают 3-5 шариков фекалий и увлажняют их небольшим количеством теплой (38-40°С) воды. Через 20-30 минут фекалии удаляют, а оставшуюся жидкость микроскопируют для выявления личинок гельминтов. Метод Вайда можно успешно применять в полевых условиях для диагностики диктиокаулеза непосредственно на фермах с использованием обычных предметных стекол и дорожного микроскопа.

Метод Бермана в модификации И. А. Щербовичаприменяется для диагностики диктиокаулеза животных. Для этого пробу фекалий массой 8—10 г помещают на кусочек марли, концы которой закручивают проволокой и подвешивают в стакан с водой при температуре 32-35°С. Пробы фекалий мелких жвачных и лошадей выдерживают в течение 3 ч, крупного рогатого скота - 12 ч. Затем пробы фекалий из стаканов извлекают, воду осторожно сливают, а осадок помещают в пробирку и центрифугируют в течение 1 минуты со скоростью 1000 об/мин. Надосадочную жидкость в пробирке сливают, а осадок кладут на предметное стекло и микроскопируют.

Экспресс-метод принудительной седиментации по Г. А. Котельникову, А. И. Корчагину и В. М. Хреновуиспользуется для диагностики диктиокаулеза и протостронгилидоза мелких жвачных. Для этого пробу фекалий овец или коз массой 3-5 г помещают в пробирку с теплой водой (26-28°С) и центрифугируют в течение 2 минут со скоростью 1500 об/мин. После этого пробы фекалий из пробирок удаляют, надосадочную жидкость осторожно сливают, а осадок после встряхивания помещают на предметное стекло и микроскопируют. Авторы сообщают о высокой (до 100 %) эффективности метода для выявления диктиокаул и мюллерий в фекалиях овец и коз.

Избирательный экспресс-метод диагностики диктиокаулеза мелких жвачных по Г. А. Котельникову и В. М. Хренову применяется для быстрого выделения из проб фекалий диктиокаул. Для этого пробу фекалий массой 5 г помещают в стаканчики с раствором сульфата цинка и в течение 2 мин их разгоняют по кругу стеклянной палочкой. Через 5—10 минут пробы удаляют из стакана пинцетом, а жидкость оставляют в покое на 10—15 минут. После этого металлической петлей диаметром 8 мм с поверхности жидкости снимают 6 капель, помещают их на предметное стекло и микроскопируют. При этом следует помнить, что личинки диктиокаул сохраняют подвижность в растворе серно-кислого цинка в течение 3 ч, личинки стронгилят желудочно-кишечного тракта, а также стронгилоиды—1-2 мин. Личинки мюллерий свертываются в клубочки и внешне напоминают пузырьки воздуха.

При отборе и отправке в ветеринарную лабораторию проб фекалий от жвачных в данном случае необходимо помнить, что исследования надо проводить в день взятия проб, так как уже при температуре свыше 20°С в фекалиях через 14-17 ч могут развиться личинки стронгилят желудочно-кишечного тракта, что затруднит диагностику.

Для дифференциации личинок диктиокаул овец предложена методика окраски, для чего к осадку добавляют 1-2 капли 0,1%-ного водного раствора метиленового синего. Через 30 с при микроскопировании можно видеть личинок диктиокаул, окрашенных в ярко-сиреневый цвет, личинки диктиокаул крупного рогатого скота — в светло-сиреневый, а личинки других нематод не окрашиваются (Г. А. Котельников,1984).

Культивирование личинок стронгилят заключается в том, чтобы для яиц этих гельминтов создать такие оптимальные условия, чтобы они могли вырасти до инвазионной стадии. По особенностям структуры личинок определяют родовую принадлежность их (табл. 11).

Культивирование личинок стронгилят жвачных по методу А. М. Петрова и В. Г. Гагарина (1953) состоит в том, что в стаканчики или в чашки Петри кладут по 10 г свежих фекалий жвачных, увлажняют и помещают в термостат на 7-10 дней при температуре 27-30°С. Ежедневно фекалии перемешивают (с целью аэрации) и при необходимости увлажняют. После указанного срока пробы фекалий закладывают в аппарат Бермана, получают личинки стронгилят, помещают их на предметное стекло и микроскопируют с целью дифференциальной диагностики.

В лаборатории паразитологии БелНИИЭВ им.С.Н.Вышелесского (Т.Я.Мясцова, 1980) с целью лучшей аэрации разработана методика культивирования личинок стронгилят в фекалиях с добавлением в них прокаленных древесных опилок. Соотношение фекалий к опилкам составляет 3:1—5:1. Остальной режим культивирования личинок стронгилят сохраняется таким же, как описано выше.

Культивирование личинок стронгилят лошадей по П. А. Величкину. В стаканы емкостью 100 мл помещают по 50 г свежих фекалий лошадей и ставят их в термостат при температуре 25-27°С. Стаканы сверху обвязывают чистым бинтом, марлей или плотной бумагой, в которой делают небольшие отверстия для аэрации. Срок культивирования личинок 6—7 дней. При культивировании личинок при комнатной температуре (20-22°С) они достигают третьего возраста через 9-10 дней. При температуре ниже 8°С развитие их не происходит. При необходимости фекалии увлажняют и периодически перемешивают.

Таблица 11 Определение инвазионных личинок стронгилят пищеварительного тракта и легких жвачных (по П. А. Полякову)

1/16 — Кишечник личинок дифференцирован на отдельные клетки — инвазионные личинки стронгилят пищеварительного тракта, кроме личинок Вunostomum.

2/3 — Клетки кишечника расположены в один ряд. Клеток 8, форма их трапециевидная. Личинки крупные (1,2—2 мм длиной), с длинным (0,3—0,37 мм) нитевидно истончающимся хвостовым концом чехлика. Хвостовой конец тела короткий (0,5 мм) и оканчивается тремя «шипиками».

3/2 — Клетки кишечника расположены в два ряда.

4/13 — Клетки кишечника имеют форму остроконечных треугольников.

5/12 — Кишечник имеет 16 клеток.

6/7 — Хвостовой конец тела личинки оканчивается «шипиком». Пищевой сравнительно длинный и составляет около 1/4 части длины личинки. Относительно малые личинки (0,65— 0,77 мм длины). Хвостовой конец чехлика короткий (0,08— 0,1 мм). Экскреторное отверстие отстоит от кишечника на расстоянии 1/3 (и более) длины пищевода— Trichostrongylus.

7/6 — Хвостовой конец тела личинки «шипика» не имеет. Пищевод составляет лишь около 1/5 части всей длины личинки.

8/9 — Две последние клетки кишечника оканчиваются в одном пункте и на одинаковом от ануса расстоянии. Относительно малые личинки (0,7—0,8 мм длиной) с довольно длинным (0,15—0,17 мм) нитевидно оканчивающимся хвостовым концом чехлика. Пищевод относительно короткий (0,15—0,16 мм). Две последние клетки кишечника не равной длины, не треугольной, а округло-веретенообразной формы и оканчиваются в одном пункте. Экскреторный канал лежит наискось, его отверстие отстоит от кишечника более чем на 1/3 длины пищевода—Нaemonchus.

9/8 — Кишечник заканчивается одной треугольной формы клеткой.

10/11 — Хвостовой конец чехлика относительно короткий (0,12— 0,14 мм), без нитевидного истончения. Личинки крупные — 0,83—0,95 мм. Половой зачаток расположен ближе к пищеводу, чем к анусу. Экскреторное отверстие отстоит от кишечника на расстоянии менее 1/3 длины пищевода — Ostertagia.

11/10 — Хвостовой конец чехлика относительно длинный (0,16— 0,18 мм). Половой зачаток расположен ближе к анусу, чем к пищеводу. Встречаются преимущественно в фекалиях крупного рогатого скота — Соoреriа.

12/5 — Кишечник имеет 20 клеток. Личинки 0,75—0,9 мм длиной с длинным (0,23—0,28 мм) нитевидно истонченным хвостовым концом чехлика. Встречаются преимущественно в фекалиях крупного рогатого скота — Оеsорhagostomun radiatum, Oe.columbianum.

13/4 — Кишечник имеет 32 клетки формы округлых кирпичиков.

14/15 — Нитевидный хвостовой конец чехлика длинный (0,23— 0,28 мм) и составляет около 1/3 части всей длины личинки. Личинка 0,75—0,9 мм длиной, 0,024—0,029 мм шириной. Встречаются преимущественно в фекалиях овец и коз — Oe.venulosum, Oe.asperum.

15/14 — Нитевидный хвостовой конец чехлика 0,17—0,27 мм длиной и составляет около 1/4 части всей длины личинки. Личинка 0,71—0,88 мм длиной, 0,028—0,032 мм шириной— Chabertia ovina.

16/1 — Кишечник личинок не дифференцирован на отдельные клетки и представлен сплошной гомогенной зернистой массой — личинки легочных стронгилят, а также инвазионные личинки — Bunostomun, Strongyloides.

17/22 — Личинки в чехликах.

18/19 — Личинки с длинным нитевидным хвостовым концом чехлика 0,52—0,63 мм длиной, 0,020—0,23 мм шириной. Хвостовой конец чехлика нитевидный, длинный (0,13—0,17 мм). Задняя часть пищевода имеет незначительное утолщение (бульбус) —Bunostomun.

19/18 — Личинки с коротким хвостовым концом чехлика, без нитевидного образования. Инвазионные личинки легочных стронгилят семейства Dictyocaulidae.

20/21 — На головном конце личинки пуговковидный выступ. Относительно крупные личинки — 0,5—0,56 мм длиной, 0,025 мм шириной, с коротким (0,05 мм), тупо закругленным хвостовым концом. Личинки, полученные из фекалий до 3-суточной давности, чехлика не имеют. Через 3—4 суток образуется первый чехлик, через 6 — второй. Личинки с двумя чехликами (инвазионные) значительно светлее и с более длинным пищеводом, равным около 1/3 длины личинки. Встречаются в фекалиях овец и коз —Filaria.

21/20 — Пуговкообразного выступа на головном конце нет. Мелкие личинки—0,3—0,35 мм длиной, 0,016—0,018 мм шириной. Хвостовой конец слегка заострен. Личинки, полученные из фекалий до 3-суточной давности, без чехлика, который образуется на четвертые сутки. Встречаются в фекалиях только крупного рогатого скота — Dictyocaulus viviparus.

22/17 — Личинки без чехликов.

23/24 — Личинки относительно длинные — 0,5—0,65 мм, но тонкие — 0,014—0.016 мм шириной. Хвостовой конец (0,08 мм) истончается равномерно и не имеет никаких отростков и изогнутостей. Пищевод длинный, светлый, достигает более 1/3 всей длины личинки. Филяриевидные (инвазионные) личинки —Strongyloides papillosus.

24/23 — Личинки короткие, менее 0,5 мм длиной, с наличием на хвостовом конце (обычно круто изогнутом) или отростка волнистых искривлений. Длина пищевода достигает 1/2 всей длины личинки. Личинки первой стадии легочных стронгилят семейства Рrotostrongylidae.

25/26 — Хвостовой конец личинки волнообразно изогнут, «шипика» (отростка) не имеет. Длина личинки варьирует в пределах 0,26—0,45 мм — Ргоtosrongylus.

26/25 — Хвостовой конец личинки на дорзальной стороне имеет «шип» (отросток).

27/28 — Кишечник личинок светлый, непигментированный. Граница пищевода с кишечником сглажена, почти незаметна. Длина личинок колеблется в пределах 0,27—0,318мм—Мuellerius capillaris.

28/27 — Кишечник личинок темный, пигментированный. Граница пищевода с кишечником хорошо заметна.

29/30 — Длина личинок 0,24—0,28мм — Вicaulus schulzi.

30/29 — Длина личинок 0,35—0,44мм — Суstocaulus nigrescens.

 

Для выделения личинок стронгилят лошадей П. А. Величкин рекомендует после окончания срока культивирования пробу фекалий завернуть в марлю и поместить в стакан емкостью 200 мл с теплой (35-36°С) водой. Для предупреждения соприкосновения пробы фекалий с дном стакана туда помещают предметное стекло или металлическую сеточку. Спустя 2-3 ч пробу удаляют, верхний слой жидкости сливают, осадок помещают в чашки Петри и микроскопируют. Для лучшей дифференциации личинок их необходимо обездвиживать, для чего к осадку в чашки Петри добавляют 8-10 капель раствора Люголя. Личинки стронгилят лошадей покрыты гофрированным чехликом, имеют длинный хвостовой конец. Личинки свободноживущих нематод гофрированного чехлика лишены и у них короткие хвостовые концы. Родовую принадлежность стронгилят лошадей определяют по внутренней структуре личинок (табл. 12).

 

Таблица 1 Определение личинок стронгилят лошадей

(по А. М. Петрову и В. Н. Гагарину)

 

1(2). Кишечник личинки состоит из 8 клеток треугольной формы; хвостовой конец чехлика прямой, тонкий, шиловидный, достигает 1/3 длины тела личинки - Тrichonema sp.

2(1). Кишечник личинки состоит из 16—32 клеток; хвостовой конец чехлика значительно короче 1/3 длины тела личинки.

3(4). Пищевод занимает 1/4 часть длины тела личинки; кишечник состоит из 32 клеток - Delafondia vulgaris.

4(3). Пищевод очень короткий, занимает примерно 1/7—1/8 часть длины тела личинки.

5(6). Кишечник состоит из 16 клеток - Strongylus eguinus.

6(5). Кишечник состоит из 20 клеток - Аlfortia edentatus.

 

Культивирование личинок стронгилоид (по Т. И. Поповой) проводят в обычных стеклянных стаканчиках, в которые помещают 50—100 г фекалий и содержат их в течение 1-2 дней при температуре 20-23°С. Вышедшие из яиц личинки стронгилоидов мигрируют на стенку стакана, образуя серо-белые скопления, которые могут сохраняться до месяца. Личинки стронгилоид из этих колоний можно использовать для экспериментального заражения животных.

Диффиренциальная диагностика гельминтов от свободноживущих нематод. В научной и практической работе нередко приходится дифференцировать личинок гельминтов от личинок свободноживущих нематод. Для этого рекомендуется применять метод Корта, суть которого состоит в том, что берут 5 мл жидкости с личинками, помещают ее в чашку Петри и добавляют туда 1 мл 40%-ного формалина. Личинки гельминтов погибают через 15—20 минут, а личинки свободноживущих нематод — уже через 5—8 минут.

Для этой же цели можно применять метод окраски по Вайду. В пробирку помещают жидкость с личинками и добавляют 1%-ный раствор метиленового синего в соотношении 1:2 и оставляют на 15 минут. Затем пробирки помещают в центрифугу, центрифугируют, надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют воду, опять центрифугируют и так повторяют 4-5 раз, пока осадок не отмоется от краски. Затем осадок помещают на предметное стекло и исследуют. Свободноживущие живые нематоды и их личинки не окрашиваются, а инвазионные живые личинки гельминтов окрашиваются интенсивно, хотя сохраняют окраску только в течение 15-20 минут. Погибшие свободноживущие нематоды и гельминты окрашиваются интенсивно и не теряют окраски.

Метод гельминтоскопии обычно применяют для обнаружения половозрелых гельминтов, их фрагментов или молодых форм гельминтов. Нередко гельминты у животных выделяются самопроизвольно, поэтому при исследовании фекалий можно обнаружить или их целых, или фрагменты. Членики или фрагменты стробилы систематически отделяются у высших цестод. Принято считать, что гельминтоскопия имеет определенное значение при постановке диагноза на цестодозы (обнаружение мониезий, авителлин и др.), а также при проведениидиагностической дегельминтизации. Последняя применяется при подозрении на заражение тем или иным гельминтом. При этом отбирают группу животных и (в зависимости от подозрения на определенный гельминтоз) назначают соответствующий антгельминтик. Фекалии от животных собирают в течение суток и исследуют их на наличие гельминтов или их фрагментов.

ПОСМЕРТНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ ЖИВОТНЫХ

НА ГЕЛЬМИНТОЗЫ

Эти методы применяют при падеже животных, их вынужденном убое или при специальном убое животных с диагностической целью. Посмертные методы исследований животных на наличие тех или иных гельминтов используют также при испытании эффективности антгельминтиков, когда необходимо учесть не только экстенсивность, но и интенсивность заражения животных гельминтами.

При вскрытии животных учитывают их возраст, упитанность, наличие гельминтов (трематод, цестод, нематод и др.), степень поражения тех или иных органов. Диагноз ставят только с учетом всех данных, обнаруженных при вскрытии животного.

Метод полного гельминтологического вскрытия животных по К.И. Скрябину. Его применяют в тех случаях, когда необходимо иметь полную картину заражения гельминтами различных органов и тканей животного. Для этого вначале проводят наружный осмотр животного, затем снимают кожу. На наличие гельминтов исследуют кожу, подкожную клетчатку, различные новообразования и все иные патологические изменения. Извлеченные отдельные органы помещают в ведра, кастрюли, кюветы; спинной и головной мозг, глаза, соскобы со слизистых носовых ходов и т. д.— в отдельную посуду.

Внутренние органы изучают мокрым или сухим способом. Мокрый способ предполагает:

1. Многократное промывание водой или физиологическим раствором содержимого полостей различных органов с целью выделения гельминтов.

2. Исследование сливов в ряде цилиндров при изучении желудочно-кишечного тракта животных.

3. Компрессорное исследование соскобов с целью обнаружения находящихся в слизистой оболочке органов гельминтов.

4. Размозжение тканей паренхиматозных органов между стеклами.

5. Изучение отмытого содержимого полостей разных органов (так называемых матриксов) поочередно на белом и черном фоне.

6. Исследование матриксов, соскобов и размозженных тканей при помощи лупы с целью окончательной диагностики на наличие гельминтов.

Сухой способ — это раздавливание органов между стеклами до прозрачности и просмотр их под лупой без вскрытия и промывания. Им пользуются при изучении моллюсков, мелких рептилий и других организмов. В практике нередко применяют комбинацию мокрого и сухого способов.

При полном гельминтологическом вскрытии органов пищеварения их осторожно отделяют от других органов, чтобы не пролить содержимого и не повредить крупных гельминтов.

Гортань, трахею, крупные и мелкие бронхи разрезают, осматривают и исследуют соскобы со слизистых оболочек. Легкие разрезают на мелкие части и исследуют методом последовательного промывания. Сердце и крупные кровеносные сосуды вскрывают, несколько раз промывают водой и осадок изучают.

Головной и спинной мозг разрезают на мелкие кусочки, при необходимости используют лупу.

Глаза животных вскрывают и исследуют внутренние среды, а также веки, конъюнктивальный мешок с помощью метода последовательных промываний.

Пищевод вскрывают тупоконечными ножницами, осматривают внутреннюю и наружную оболочки, делают соскобы слизистой и просматривают их под лупой.

Желудок вскрывают по большой кривизне, содержимое его извлекают и помещают в отдельную посуду и изучают методом последовательных промываний. Слизистую желудка снимают и просматривают под компрессориумом или переваривают в искусственном желудочном соке для обнаружения гельминтов (оллулан и др.).

Тонкий и толстый кишечник вскрывают и исследуют отдельно. Их с содержимым помещают в посуду, несколько раз промывают и изучают осадок. Со слизистых берут соскобы и исследуют при помощи компрессориума, лупы или переваривают в искусственном желудочном соке с последующим изучением осадка.

Желчный пузырь отделяют от печени, которую помещают в сосуд белого цвета, заливают водой и измельчают на мелкие кусочки. Затем полученную массу несколько раз промывают водой и осадок осматривают под лупой. Аналогично поступают и с поджелудочной железой. Желчный пузырь вскрывают, несколько раз промывают водой и осадок исследуют на белом фоне.

Каждую почку разрезают скальпелем, осматривают почечную лоханку, паренхиму почки раздавливают и помещают под лупу. Мочевой пузырь вскрывают, осматривают, делают соскобы со слизистой и исследуют. Мочу в отдельной посуде несколько раз промывают и осадок изучают.

Половые органы изучают с применением метода последовательных промываний измельченных тканей. Делают также соскобы и их исследуют под лупой.

Метод полного гельминтологического исследования отдельных органов состоит в том, что определяют наличие гельминтов в отдельных органах по изложенной выше методике. Например, для обнаружения фасциол вскрывают печень и желчный пузырь. Для обнаружения диктиокаул исследуют бронхи, для обнаружения аскарид— тонкий кишечник и т. д.

Метод неполных гельминтологических вскрытий часто проводят при патологоанатомическом исследовании трупов животных. Из органов и тканей извлекают сравнительно крупных гельминтов (фасциол, аскарид, цестод и др.), при необходимости подсчитывают их количество.

 

Другие методы гельминтологических исследований

органов и тканей, дополняющие методы К. И. Скрябина

Диагностика эхинококкоза по М. Д. Орехову (1970).Эхинококковые пузыри развиваются медленно, поэтому в ранний период обнаружить их довольно трудно. Например, в возрасте 5 месяцев они имеют величину 5-7 мм и содержат небольшое количество прозрачной жидкости. Поэтому только при тщательном осмотре измельченных печени, легких и других внутренних органов можно обнаружить малой величины эхинококковые пузыри. При микроскопии на внутренней оболочке вскрытого пузырька можно обнаружить 1-2 скобочки или складочки. Это — будущие лакуны, из которых через полтора года образуются сколексы, способные инвазировать дефинитивного хозяина.

Диагностика фасциолеза по Б. Салимову и А. Куприяновой (1978). Для более полного сбора половозрелых и молодых форм фасциол печень разрезают по желчным протокам на крупные куски, помещают в сосуд с теплым физиологическим раствором (37-40°С). При этом большинство живых фасциол выходят из тканей и оседают на дно сосуда. После этого куски печени отжимают с целью извлечь из них оставшихся гельминтов и помещают в другую посуду. Верхний слой жидкости осторожно сливают, а осадок исследуют на наличие гельминтов.

В другом сосуде большие куски печени хорошо измельчают в воде или физрастворе и отстаивают. Более крупные кусочки печени и основная масса трематод оседают на дно, а более мелкие кусочки печени и часть молодых трематод всплывают наверх. Поэтому надосадочную жидкость фильтруют через капроновую сетку в отдельную посуду. Жидкость отстаивают, несколько раз промывают водой, верхний слой жидкости осторожно сливают, а осадок исследуют. Задержавшуюся на капроновой сетке массу промывают и рассматривают с помощью лупы. Отдельно исследуют и желчный пузырь с содержимым. Этот метод можно применять и для обнаружения дикроцелий.

Применение искусственного желудочного сока для исследования проб внутренних органов. Сущность метода заключается в том, что живые гельминты и личинки устойчивы к желудочному соку, в то время как ткань, в которой они находятся, переваривается.

Для исследования применяют искусственный желудочный сок, содержащий 3 % пепсина и 1-2 % соляной кислоты. Им заливают измельченные ткани в соотношении 1:15. Ткани с желудочным соком в сосуде помещают в термостат при температуре 37-39°С. Сосуд с содержимым периодически вынимают из термостата и массу перемешивают. В зависимости от исследуемого материала время переваривания длится от 30 минут до нескольких часов. После этого осадок исследуют под микроскопом или с помощью лупы.

Диагностика оллуланоза по Ф. А. Волкову (1980). Со слизистой оболочки кардиальной, фундальной и пилорической части желудка делают глубокие соскобы. Готовят искусственный желудочный сок: пепсина 3 %, соляной кислоты 2 %. Полученные соскобы желудка заливают искусственным желудочным соком в соотношении 1 : 20. Сосуд с соскобами и желудочным соком помещают в термостат при температуре 37-39°С. Массу в сосуде периодически перемешивают. Срок переваривания неконсервированного материала 28 минут, консервированного в жидкости Барбагалло - 30. После этого взвесь осаждают и осадок исследуют под микроскопом на наличие оллулан.

Исследование глаз для обнаружения телязий. После наружного осмотра глаз с помощью ножниц Купера их экстирпируют (глазное яблоко вместе с прилегающими тканями). С целью осмотра конъюнктивы и конъюнкти-вального мешка разрезают внутренний и наружный углы глазной щели, а затем осматривают конъюнктивальную полость, протоки слезной железы. При заражении телязиями в отверстиях слезных протоков видны концы телязий. При надавливании пальцами на стенки слезных протоков гельминты легко выдавливаются в виде клубочков. После этого осматривают также конъюнктиву мешка, третье веко и прилегающую к нему железу, а также отверстия ее слезных протоков. Слезную железу расправляют, а крупные протоки вскрывают глазными ножницами. Паренхиму слезной железы измельчают, помещают в небольшую кювету или чашку Петри с физиологическим раствором и исследуют методом последовательных промываний. Осадок исследуют на темной бумаге.

Слезные железы сразу же после отделения можно поместить в чашку Петри с физиологическим раствором (27—30°С) и оставить на 10-15 минут. В течение этого времени все живые телязии выйдут из слезных протоков. Для выделения личинок телязий из слезных желез О.Н.Третьякова (1965) предлагает использовать метод Бермана. Для этой цели слезные железы измельчают, помещают в аппарат Бермана с температурой раствора 25-30°С. Через 40-50 минут верхний слой жидкости сливают, а осадок центрифугируют и микроскопируют.

Исследование мышц животных на наличие личинок трихинелл. Личинки трихинелл находятся в мышечных волокнах поперечно-полосатой мускулатуры, в связи с чем на трихинеллез исследуют туши свиней, диких кабанов, нутрий и других животных, мясо которых человек может использовать в пищу. Наиболее часто трихинелл обнаруживают в диафрагме и ее ножках, в языке, мышцах пищевода, а также в мышцах наружных жевательных, шейных, межреберных и др.

Трихинеллоскопия с применением компрессория.Откаждой туши животных берут по 60 г мышечной ткани (лучше — из ножек диафрагмы) и ножницами Купера делают 24 среза величиной с овсяное зерно. Все срезы закладывают в компрессорий, пластины его сдавливают с помощью винтов, помещают под микроскоп или трихинеллоскоп с экраном и исследуют. Инкапсулированные личинки трихинелл имеют овальную или лимоновидную форму. Внутри капсулы обычно находится одна, реже — две-три личинки. Длина капсулы 0,5—0,7 мм, ширина 0,2—0,3 мм. Когда встречаются обызвествленные капсулы, личинки в них не видны. Для выявления личинок трихинелл срезы мышц помещают в чашку Петри с 5-10%-ным раствором соляной кислоты. Чашку Петри ставят в термостат при температуре 37°С на 25-30 минут. После этого срезы мышц помещают в компрессорий и исследуют при малом увеличении микроскопа.

Личинки трихинелл необходимо дифференцировать от мишеровых мешочков (с саркоспоридиями), цистицерков (финн). В отличие от личинок трихинелл мишеровы мешочки не имеют соединительно-тканной капсулы, оболочка их тонкая, прорастает внутрь и делит мешочек на ячейки, внутри которых находятся мерозоиты. Мишеровы мешочки могут быть различной формы (вытянутые, округлые, веретеновидные и др.) размерами от 0,005 до 4-5 мм длиной и от 0,002 до 3 мм шириной.

В отличие от личинок трихинелл молодые цистицерки (финны) локализуются не в мышечных волокнах, а между ними. Величина их варьирует от 0,03 до 15 мм. Чаще их обнаруживают в мышцах сердца.

Когда возникают сомнения в постановке диагноза на трихинеллез при трихинеллоскопии, кусочки мышц переваривают в искусственном желудочном соке и проводят исследование осадка.

Выделение трихинелл методом переваривания проб мышц в искусственном желудочном соке (по Г. А. Котельникову, 1984). Вначале готовят искусственный желудочный сок по следующей прописи: соляной кислоты концентрированной 7 мл, пепсина 7 г, воды до 1 л. На 1 л искусственного желудочного сока берут 80—100 г фарша, который помещают в стеклянный сосуд и тщательно перемешивают. После этого стеклянный сосуд с содержимым помещают в термостат при температуре 37°С на 16—18 ч. Содержимое в сосуде периодически перемешивают с помощью магнитной (лучше — электрической) мешалки. После окончания переваривания массу из сосуда переносят в аппарат Бермана, используя сито из мельничного газа (№ 26). Через полтора-два часа все личинки трихинелл, находившиеся в пробе фарша, оседают на дно пробирки. Верхний слой жидкости в пробирке отсасывают пипеткой, а осадок микроскопируют.

Ускоренный способ выделения личинок трихинелл (по П. А. Владимировой, 1965). Суть данного способа состоит в том, что применяется искусственный желудочный сок с повышенным содержанием пепсина. На каждый 1 л искусственного желудочного сока используется 10 мл концентрированной соляной кислоты и 30 г медицинского пепсина. Пробу фарша массой 10 г помещают в стеклянную посуду и заливают искусственным желудочным соком в соотношении 1:25 или 1:50, ставят в термостат при температуре 42-47°С на 3,5 ч. Осадок отстаивают в пробирке 30 минут и микроскопируют.

Метод группового исследования свинины на наличие трихинелл с помощью аппарата АВТ-у (по А. С. Бессонову, А. В. Успенскому и Н. В. Шеховцову, 1980). Данный аппарат предназначен для обнаружения личинок трихинелл в свиных тушах при их переработке на мясокомбинатах. Он представляет собой термостатирующее устройство с вмонтированными в него реакторами, в которых происходит процесс переваривания групповых проб мышц в искусственном желудочном соке. Все процессы, связанные с перевариванием проб, очисткой и концентрацией личинок, механизированы и автоматизированы.

Подготовка к работе, внесение групповых проб мышц и переваривающей жидкости занимает не более 7 минут. Процесс переваривания проб мышц продолжается 20-25 минут. При наличии в пробе мышц личинок трихинелл они концентрируются в специальном приемнике. Микроскопия осадка на наличие трихинелл занимает всего 5-7 секунд.

В течение одного цикла с помощью АВТ-у можно исследовать 240 образцов мышц массой 5 г и 1200 образцов массой 1 г. Обслуживают один или несколько таких аппаратов, объединенных в линию, ветеринарный врач и лаборант. Применение аппарата АВТ-у на предприятиях увеличивает точность исследований и в 2-3 раза повышает производительность труда по сравнению с компрессорной трихинеллоскопией.

Аппарат АВТ-у изготовляется в научно-производственном объединении «Агроприбор», 117259, Москва, Б. Черемушкинская, 28, ВИГИС.

Исследование мышц крупного рогатого скота и свиней с целью обнаружения цистицерков (финн). При экспертизе туш крупного рогатого скота проводят общий осмотр мускулатуры и сердца. После этого делают по два разреза наружных массетеров и по одному — внутренних. Делают также 1-2 продольных и один поперечный разрез мышц сердца для обнаружения финн. Если на площади разреза 40 см² обнаруживают более 3 погибших или живых финн, тушу, голову, язык, сердце и другие имеющие мышечную ткань органы отправляют на техническую утилизацию. При обнаружении на этой же площади разреза менее 3 финн тушу и все органы с мышечной тканью обезвреживают проваркой, промораживанием или посолкой.

Бовисные цистицерки необходимо дифференцировать от молодых тонкошейных мелких эхинококковых пузырей, саркоцист и других паразитов. Следует иметь при этом в виду, что тонкошейные цистицерки локализуются на серозных покровах и в печени. При микроскопии пузырьков тонкошейных цистицерков можно обнаружить сколекс с присосками. У бовисных цистицерков крючков нет. Эхинококковые пузыри мелких размеров имеют толстую кутикулу, локализуются они в основном в печени и легких, реже — в других органах. Саркоцисты у крупного рогатого скота встречаются в основном в пищеводе и представляют собой пузырьковидные образования, внутри которых находятся споры длиной 0,015 мм.

Свиные цистицерки (финны) имеют форму пузырька величиной до 10 мм. Они отличаются от бовисных тем, что сколекс их вооружен двумя коронами крючьев (22-32 крючка). Локализуются они в жевательных мышцах, а также мышцах сердца, языка, межреберных и других.

Следует помнить, что болезнь, вызываемую свиными цистицерками, диагностируют и у человека, заражение которого происходит при заносе яиц тении в рот с пищей, загрязненными руками, а также в процессе антиперистальтики кишечника, когда в желудок попадают членики цестоды. При этом онкосферы этого возбудителя мигрируют по организму и могут попадать в мозг, глаза, другие органы и ткани. Для определения жизнеспособности цистицерков бычьего и свиного цепней из мышц убитых животных извлекают несколько финн и помещают в чашки Петри со смесью равных частей физраствора и желчи при температуре 35-40°С. Чашки Петри ставят в термостат при такой же температуре. Если финна живая, то из пузыря ее через 10 минут (иногда несколько позже) начинает выворачиваться шейка и сколекс. Необходимо помнить, что в одной и той же туше животных финны могут быть живые и мертвые. Поэтому для исследования их необходимо брать из разных мест туши.

ДИАГНОСТИКА АРАХНО-ЭНТОМОЗОВ

Членистоногие Аrthropoda насчитывают на земном шаре до 1 млн. видов. Среди них встречаются как полезные, так и вредные для человека и животных организмы. Многие членистоногие, будучи паразитами человека и животных, у своих хозяев вызывают тяжелые заболевания или служат переносчиками возбудителей многих болезней.

Тип членистоногих включает несколько классов, основными из которых являются паукообразные (Аrаchnoidea), насекомые (Insecta), ракообразные (Сrustacea) и др.

Клещи относятся к классу паукообразных, для которых характерными признаками являются: отсутствие антенн (усиков, сяжков), пластинчатых легких, наличие видоизмененных первых двух пар конечностей, выполняющих роль челюстей, наличие четырех пар ног у нимф и взрослых особей. Сравнительные признаки паукообразных и насекомых для наглядности показаны также в табл.13.

Таблица 13

 

Сравнительные признаки паукообразных и насекомых

 

Признаки	Насекомые	Паукообразные
Строение тела	Подразделено на три отдела: голову, грудь и брюшко	Расчленено на голово-грудь и брюшко у пауков, слито в один общий отдел у клещей
Антенны	В основном имеются	Отсутствуют
Крылья	Обычно имеются	Отсутствуют
Конечности у взрослых особей	Три пары, причленяются к груди	Обычно – четыре пары