Исторические сведения

Ящур - инфекционное заболевание, которое известно достаточно давно. Впервые описание ящура встречается в 1546 году в Италии. Первые сообщения научного характера о ящуре у людей были опубликованы Sagare в 1764 г., который наблюдал более 1500 случаев афтозной ящурной лихорадки. Почти через сто лет была доказана возможность заражения ящуром через молоко, когда в 1834 г Hertwig, Mann и Villain в течение 4 дней пили сырое молоко от больной ящуром коровы и все трое заболели ящуром. Заболевания у людей в те времена были достаточно многочисленны и регистрировались во время и в местах вспышек этой болезни среди животных. Заслугой российской медицины было доказательство возможности заражения животных не только друг от друга, но и от уже заболевших ящуром людей. Так Н.И.Шантырь в 1891 г. провел простой и показательный опыт, когда содержимым из стенок пузырьков на коже, взятым у больной девочки, он заразил здоровых телят, которые через 4 и 5 дней заболели типичной клинически выраженной формой ящура.

В 1897 году впервые возбудитель был открыт учеными Леффлером и Фрошем, которые установили, что заразное начало при ящуре проходит через обычные глиняные фильтры. В 1922 году Валле и Карре при изучении ящура установили 2 разных типа вируса ящура, которые не давали перекрестного иммунитета и дали им название О и А.

Немецкий ученый Вальдман выделил 3-й тип С. Англичане выделили SAT 1, SAT 2, SAT 3, и Asia 1.

В 1910 году ящур охватил весь континент, а в 1919 году эпидемия повторилась снова. В 1937 году ящур завезли в Европу из Африки. В 1950 году ящур снова появился в Европе, проник в СССР и последнее десятилетие вспышки ящура регистрируются в нашей стране.

Экономический ущерб, наносимый ящуром, очень огромен и складывается от гибели молодняка и снижения удоя.

 

Источники и пути передачи инфекции. Основным источником инфек­ции являются животные в острой стадии болезни, выделяющие в окружаю­щую среду заразное начало со слюной, лимфой из лопнувших афт, молоком, мочой и каловыми массами. С момента заражения и до появления первых симптомов болезни (скрытый или так называемый инкубационный период болезни) обычно проходит от одного дня до 7, а иногда и до 14 дней. За это короткое время больное животное успевает контаминировать вокруг себя корм, подстилку, кормушки, воду, поилки, молочную посуду, инвентарь (лопаты, вилы, скребницы, метлы), стены и полы помещения, одежду и обувь обслуживающего персонала. Выделяется вирус и с выдыхаемым воздухом.

Наиболее частое заражение происходит вследствие непосредственного контакта больных животных со здоровыми в скотных дворах, на рынках, пастбищах, трассах перегона скота на пастбища и т. д. В распространении ящура серьезную роль играют продукты и сырье животного происхождения: молоко, мясо, субпродукты, кровь, кости, кожа, шерсть, копыта и рога от убитого скота. Навоз, подстилочный материал, сено, солома, отруби, загрязненные выделениями больного скота, — источник ящурной инфекции. При несоблюдении правил санитарной и личной гигиены люди, ухаживаю­щие за больными животными, могут переносить ящур на руках, одежде и обуви, а также на предметах ухода за скотом.

Переносчиками инфекции могут быть и не восприимчивые к ящуру жи­вотные, например собаки, кошки, лошади, а иногда и куры, утки, гуси, воробьи и другие птицы.

 

 

Локализация вируса, вирусовыделение у естественно восприимчивых животных. В инкубационный период от больного рогатого скота вирус можно выделять из молока в течение 7 дней и из спермы в течение 4 дней до появления клинических признаков. В период, когда болезнь выражена клинически, эпителий и жидкость везикул содержат большое количество вируса (10⁸ инф. ед/г ткани или мл афтозной жидкости). Аналогичные результаты получены и при исследовании больных свиней и овец. В слюне вирус можно обнаружить еще до появления клинических признаков болезни в количестве 10² - 10³,⁷ ЛД5о/мл, а в период проявления симптомов 10^4,5 - 10⁶,⁰ ЛД5о/мл для мышат-сосунков. Большинство секретов и экскретов инфекционны 4—5 дней, а слюна – 11 дней.

Независимо от способа экспериментального заражения (интраназально, внутримышечно) овец вирус обнаруживали в органах дыхания и регионарных лимфатических узлах; у больных животных наблюдали выделение вируса с пищеводно-глоточной и носовой слизью до 10-го дня (срок наблюдения). В неблагополучном стаде всегда могут быть животные без клинических признаков болезни, но выделяющие со слюной вирус. Особенно опасны в этом отношении овцы, у которых яшур может протекать без проявления клинических признаков болезни. Переболевание может сопровождаться длительным вирусоносительством, что особенно четко показано у рогатого скота.

ХАРАКТЕРИСТИКА ВИРУСА:

 

1) Морфология и химический состав. Вирус относится к семейству Picornoviridae, роду Aphthovirus. Вирионы вируса представляют собой мелкие (pico) РНК содержащие (rnа) сферические частицы икосаэдрической формы диаметром 23—25 нм, 8 - 12 нм (ультрафильтрация), 17 – 20 нм (ультрацентрифугирование), 20 – 32 нм (электронная микроскопия), мол. массой 7х10⁶ Д. Они состоят из внутренней части, представленной РНК, и белковой оболочки (капсида), которая состоит из 32 структурных компонентов (капсомеров), расположенных в кубической симметрии. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНK и 68,5% белка.

 

2). Тропизм, место размножения в клетках. Вирус ящура имеет широкий тканевой тропизм. Называется эпителио-мио-кардио-нейтропным. Поражает эпителиальную, нервные ткани, сердечную мышцу. Вирус действует на эпителии слизистых оболочек и на их слоях начинается образование одной или нескольких афт или пузырьков. В практике их называют первичными, они не обнаруживаются специалистами и клинически не проявляются.

Затем вирус из первичных афт поступает в кровяное русло, одновременно повышается температура. Вирус разносится во все органы и оседает в эпителиальном слое слизистых оболочек, где вызывает образование вторичных афт (на вымени, копытце).

В этот период эпителий и содержимое пузырька содержит большое количество вируса. Необходимо помнить, что у молодняка (телят, ягнят, поросят) вирус размножается во всех тканях, но афты не образуются, так как процесс носит септический характер. После выздоровления вирус можно выделить у КРС через 8 месяцев, у овец из миндалин в течение года.

 

3).Антигенная структура. Наружняя белковая оболочка обуславливает антигенность и иммунно-химические свойства вируса. Капсид построен из четырех основных полипептидов (VP1, VP2, VP3, VP4). В зрелом вирионе содержится около 60 моле­кул каждого полипептида. Кроме четырех главных полипептидов, обычно обнаруживают один минорный капсидный полипептид (одна или несколько молекул на вирион) и небольшой полипептид VPg.

В экстрактах клеток, инфицированных вирусом ящура, обнаруживают несколько видов вирусоспецифических структур, отражающих различные ста­дии сборки вирионов и отличающихся но константе седиментации, составу полипептидов и содержанию РНК. Кроме 140S (полные вирионы), обна­ружены 75S-капсиды, по размеру и форме подобные вирионам, но не содер­жащие РНК, белковые субъединицы 12S-14S и Via-антиген (4S) (Virus infection associoted) - термолабильный комплементсвязывающий антиген, образующийся в тканях инфицированного организма или культуре клеток только при размножении в них вируса ящура, но не является составной ча­стью вируса, Он представляет собой РНК-репликазу. Все названные ком­поненты обладают антигенными свойствами, но иммуногенными являются лишь 140S и 75S-частицы. Инфекционностью обладают лишь полные вирио­ны 140S.

В настоящее время известно 7 антигенных типов вируса ящура: А, О, С, SAT I, SAT 2, SAT 3 и Азия 1. Внутри основных типов существуют варианты, или подтипы, отличающиеся друг от друга. Тип А имеет 32 варианта, тип 0—11, тип С — 5, тип SAT 1—7, тип SAT 2—3, тип SAT3 - 4, тип Азия 1-2. Известны и другие штам­мы вируса, отличающиеся от установленных вариантов. Антигенные типы и варианты, установленные в РСК, различаются и иммунологически. Перебо­левшие животные приобретают выраженный иммунитет к гомологичному вирусу. У нас в стране регистрируют А и О.

ПЛЮРАЛЬНОСТЬ – множественность, каждый вид имеет свою иммунологическую настройку организма.

В организме естественно-восприимчивых жи­вотных вирус индуцирует образование вируснейтрализующих, комплемент-связываюших и преципитирующих антител специфически для каждого серотипа вируса. Поверхностный структурный белок VP1 ответствен за образо­вание вируснейтрализующих антител, тогда как три других структурных белка (VP2, VP3, VP4) такой активностью не обладают.

В сыворотках естественно заболевших животных антитела можно обна­ружить на 8—10-й день после появления клинических признаков болезни с максимальным подъемом их титра на 16—21-й день. Затем титр комплемент-связывающих антител снижается, и к 3 мес их присутствие не устанавлива­ют, в то время как нейтрализующие антитела сохраняются в крови реконвалесцентов до 24 мес. Резистентность переболевших животных к повторному заражению связана (коррелирует) с титром вируснейтрализующих антител.

Вирус ящура обладает свойствами преципитиногена, поэтому РДП можно использовать для определения его типов и вариантов, изучения антиген­ной структуры вируса. Сыворотки крови животных-реконвалесцентов не теряют свою преципитирующую активность в течение 3 лет при хранении при 4 "С.

Пикорнавирусы реплицируются в цитоплазме. Инфекция сопровождается цитопатическими изменениями и завершается гибелью клетки. На холоде адсорбция пикорнавирусов на клетках обратима. В условиях 37° С связь вируса с клеткой быстро становится необратимой. Полагают, что белок VP4 участвует в прикреплении вируса к клетке.

Антигенный спектр отдельных вариантов вируса ящура в пределах од­ного и того же типа различается по широте. Например, вариант О₂ индуци­рует антитела, эффективные как против гомологичного вируса 0₂, так и против O₁. При этом антител против O₁ образуется больше, чем против варианта О₂. Все варианты, относящиеся к типу А, индуцируют в различной степени и образование антител, и против гетерологичного варианта.

4). Культивирование вируса в лабораторных условиях. Ви­рус ящура можно поддерживать серийными пассажами на естественно восприимчивых животных (крупном рогатом ско­те, свиньях, овцах, козах), однако данный метод дорог и связан с опасностью выноса вируса за пределы учреждения. Поэтому чаще в лабораторных условиях стандартные и полевые штаммы вируса поддерживают на морских свинках, белых мышатах-сосунках, крольчатах и в культуре клеток. Следует иметь в виду, что длительное пассирование вируса ящура на лабораторных (естественно невосприимчивых) животных, а также в культуре клеток ведет к аттенуации вируса (при сохраненин исходной типовой принадлежности) и непригодности его для изготовления инактивированной вакци­ны

Вирус хорошо размножается в культуре клеток почек чувствительных животных, в культуре эксплантатов эпителия языка и рубца крупного рогатого скота и в некоторых перевиваемых линиях клеток: ВНК-21, IBRS-2, IFFA-3, СПЭВ и др. В культуре клеток вирус размножается, как правило, с выраженным ЦПД и накапливается в титре 10⁷ – 10⁸ ТЦД_50/мл.

Размножение вируса ящура в культуре клеток – наиболее перспективный и широко применяющийся метод получения больших количеств вируса, необходимых при изготовлении диагностикумов, инактивированных и живых вакцин. При изготовлении инактивированной противоящурной вакцины вирус культивируют также в переживающей ткани эпителия языка здоровых животных по методу Френкеля.

Экспериментальная инфекция легко воспроизводится путем аппликации вируссодержащего материала в скарифицированную поверхность слизистой языка, десен крупного рогатого скота, овец и свиней (в пятачок), а также подкожной инакуляцией вируса новорожденным мышатам или крольчатам и внутрикожного введения материала в плантарную поверхность задних лапок морских свинок.

 

 

5). Устойчивость к физико-химическим воздействиям. Вирус ящура устойчив к эфиру, хлороформу, четыреххлористому углероду, фреону, ацетону, он быстро инактивируется в сре­де с рН==6,0 и ниже, наиболее стабилен при рН=7,0—7,5. Сдвиги рН как в кислую, так и в щелочную стороны ведут к изменению свойств вируса. Известь, хлорная известь, кре­олин, крезол, фенол, сулема убивают вирус лишь через не­сколько часов воздействия. Растворы щелочей 2%-ные — за 10 мин, формальдегид в концентрации 0,009% инактивирует 90% вируса при 4° С в течение суток. Устойчивость его к раз­личным температурам зависит от штамма, субстрата, степени очистки и других факторов. Высокая температура губитель­но действует на вирус: 90% его теряет активность при 61° С и рН=7,5 в течение 3 с; при 49° С — за 1 ч; при 37° С — за 21 ч. Однако вирус устойчив к влиянию факторов внешней среды; в обрывках эпителиальных стенок афт вирус сохраня­ет вирулентность 67 дней. Афтозная лимфа, содержащая ви­рус ящура, инактивируется при температуре 31° С за 24 ч. Полную инактивацию вируса типа О в молоке наблюдали при температуре от 66 до 78° С через 40 с. Некоторые штаммы вируса обладают повышенной терморезистентностью. Низкие температуры консервируют вирус, при минус 40 и 70° С он сохраняет биологические свойства в течение нескольких лет, в навозной жиже — 39 дней, в сточных водах — до 103 дней. На поверхности стогов сена он выживает летом один день. В 50% -ном растворе глицерина на фосфатном буфере (рН== 7,2) при 4° и 8° С вируссодержащий материал сохраняет ифекционность в течение 40 дней. Данный консервант широко используют при пересылке материала в лабораторию. Вирус хорошо сохраняется в лиофилизированном виде. Некоторые штаммы вируса чувствительны к действию протеаз. К веществам, инактивирующим вирус с сохранением его антигенных свойств, относятся формальдегид, этиленимин, гли-цилальдегид. Практически не разрушаются в процессе инактивации этими препаратами 140 S-частицы вируса ящура. Бета-пропиолактон оказывает нежелательное влияние. В процессе хранения инактивированных препаратов при +4° С в течение года лучшие результаты получены с глицилальдегидом (сохранность 80—90% 140 S-частиц), хорошие с производными этиленимина и формальдегидом.

6). Изменчивость.Вирус очень изменчив, при его культивировании на средах живых клеток лабораторных животных он утрачивает свою патогенность к животному, от которого выделен, и усиливает патогенность к которому пассажируем, поэтому различные типы вируса и антиген, варианты вируса являются результатом естественной приспособительной изменчивости под влиянием иммунологических и других факторов в процессе взаимодействия восприимчивой клетки и вируса.