Экспресс-диагностика чумы

Экспресс-диагностика чумы. Возбудитель чумы был открыт в 1894 году в Гонконге А.Иерсеном и в его честь был назван Yersinia pestis.

К роду иерсиний относятся также Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica, вызывающие септические гастроэнтероколиты или иерсиниозы. Чума особо опасная, очень тяжелая кровяная инфекция, склонная к широкому распространению и дающая высокий процент смертности от 20 до 100. Это зоонозная трансмиссивная природно-очаговая инфекция. Источники - крысы, суслики, песчанки, полевки, сурки, мышевидные грызуны.

Переносчики - кровососущие насекомые. В составе бактерий чумы содержится более полутора десятков специфических и групповых антигенов. Переболевшие приобретают пожизненный, устойчивый иммунитет фагоцитарного характера. Материал для исследования содержимое бубонов, отделяемое язв, мокрота, кровь, испражнения. Метод бумажных индикаторных систем. Классические методы посев на среды Гисса громоздки, требуют много времени и большого количества питательных сред, имеющих ограниченный срок годности.

В настоящее время эти методы не удовлетворяют запросам противочумной системы. В настоящее время наиболее перспективным методом определения ферментативной активности штаммов возбудителя чумы с целью идентификации выделяемых культур и изучения их свойств можно считать метод углеводно-бумажных дисков, предложенный В.М.Никитиным и С.В.Плугару. В качестве среды лучше использовать бульон Хоттингера, т.к. он дает наиболее быструю ферментацию 3 часа. Целесообразно применять БИС в полевых условиях, так как наборы компактны и могут длительное время храниться при комнатной температуре.

Фаготипирование. 1. Внесение бактериофага в исследуемый материал в момент его посева на агар с генцианвиолетом позволяет обнаружить под микроскопом негативные колонии фага или дорожку в первые часы, когда рост бактерий еще почти не заметен через 2,5 3 часа. Метод прост, доступен и дает хорошие результаты при высокой концентрации чумного микроба и при относительно большом содержании посторонних микроорганизмов. 2. Определение нарастания титра чумного фага, вносимого в исследуемый материал, где в случае наличия возбудителя фаг начинает размножаться уже через 30-40 минут.

В жидкий исследуемый материал 25-50-100 мл и в контрольную жидкость добавляют столько фага, чтобы получить его разведение 150 1100 ставят пробы в термостатах при 370C на 45-60 минут. После инкубации берут 0,5 мл жидкости из каждой пробы и разводят бульоном в 10 раз из этого первого разведения фага готовят серию последовательных 10-кратных разведений до 10-10 10-11. По 0,5 мл жидкости из каждого разведения исследуемого и контрольного рядов добавляют к 2,5 мл полужидкого агара 0,1, предварительно расплавленного и затем охлажденного до 48-500С. Тут же к агару добавляют 0,1 0,2 мл взвеси 1 2 суточной индикаторной культуры вакцинный штамм чумного микроба, содержащий 15-20 млрд микробов в 1 мл. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и выливают на чашки Петри с 2 агаром Хоттингера.

После того, как полужидкий агар застынет, чашки перевертывают дном кверху и ставят в термостат при 370С. Учет результатов производят через 3-4 часа. На фоне сплошного роста индикаторной культуры видны стерильные пятна негативные колонии фага, количество которых на чашках с исследуемым материалом может превосходить в 100-1000 и более раз число негативных колоний на контрольных чашках.

Благодаря хорошей диффузии фаговых частиц и бактериальных клеток через полужидкий агар двухслойный метод дает стерильные пятна большего размера, чем при размазывании исследуемой массы шпателем по поверхности агара.

Подсчет колоний ведут в счетной камере. А также РИФ, РПГА и др.