Препаративная гель-фильтрация. В целом, конечно, закономерности для препаративной гель-фильтрации аналогичны остальным видам препаративной жидкостной хроматографии, но поскольку наши исследования связаны именно с гель-фильтрацией, считаем нужным остановиться подробнее именно на препаративной гель-фильтрации.
Размер колонки является главным фактором, влияющем на масштаб препаративного разделения. С увеличением внутреннего диаметра колонки размер образца, объм вводимой пробы и скорость потока элюента могут быть увеличены. Для препаративных разделений обычно предпочитают работать в условиях максимальных скоростей потоков и нагрузок, это позволяет проводить разделение без заметной потери разделительной способности. До тех пор, пока поддерживается разумная скорость потока, и колонка не перегружена, эффективность разд. способность определяемая числом теоретических тарелок, часто увеличивается с ростом площади поперечного сечения для колонок равной длины.
В общем случае как размер образца, так и объмная скорость потока могут быть увеличены пропорционально площади поперечного сечения колонки, независимо от типа или размера частиц насадки. Из-за высокой стоимости частиц сорбента малого размера 10мкм, чаще используют для стандартных и крупномасштабных разделений частицы большего диаметра 30-60 мкм с широким распределением по размерам 3. Также следует упомянуть о циклической гель-хроматографии, в этом случае фракции, получаемые на выходе из колонки могут быть подвергнуты повторному разделению на той же колонке для повышения их чистоты. Также возможен вариант при котором повторное разделени осуществляется на другой колонке.
Процесс увеличения длины колонки может быть повторн до тех пор, пока образец подлежащий разделению занимает весь объм колонки.
Преимущества циклического разделения требутся меньше растворителя, снижается противодавление колонки, что позволяет увеличить время жизни, использовать большие скорости потока. Но есть и недостатки. Так при циклизации происходит размывание зон - главный источник которого - мртвый объм трубопроводов и насосов. Кроме того для образцов с широким М.М.Р. при проведении первого цикла весь объм пор будет занят, и при циркуляции реализовываться лишь небольшое увеличение разрешения. Также при циркуляции концентрации фракций уменьшаются, поэтому необходимо концентрировать выделенные фракции, что ведт к дополнительным затратам и усложняет весь процесс в целом.
Также надо сказать, что сбор фракций становится более сложным для автоматизации, особенно если необходимо селективно удалять фракции на определнных стадиях процесса. В 3 имеется ссылка на то, что выделение веществ циклической хроматографией более качественное но более дорогое, хотя в ряде работ при разделении веществ с низкими молек.
Массами была получена экономия растворителя и продлена жизнь колонки. ОПТИМИЗАЦИЯ ПРРЕПАРАТИВНОЙ ГЕЛЬ-ФИЛЬТРАЦИИ. Надо сказать, что теория и практика аналитического разделения подходит и к препаративному разделению, что конечно упрощает процесс оптимизации, учитавая то, что только эксперимент позволяет подобрать наиболее выгодные условия для разделения. Так если в лаборотории найдена оптимальная линейная скорость потока, то е же можно поддерживать и в колонках большего диаметра препаративных.
Тогда соответственно для объмной скорости FPDPDа2 Fа, где а- аналитическая система, P- препаративная система В 3 рассматривается влияние некоторых параметров на эффективность препаративного разделения. Так было установлено, что при увеличении скорости потока падает Rs. В 3 также есть ссылки на то, что хотя число теоретических тарелок резко уменьшается с увеличением скорости потока, при низких нагрузках, но однако скорость мало влияет на число Т.Т. при высоких нагрузках.
Оптимальный вводимый объм в препаративной хроматографии в отличие от аналитической зависит главным образом от диаметра колонки, е длины и требуемого разрешения. Число Т.Т. по видимому менее чувствительно к увеличению объма образца в тех случаях, когда увеличивается диаметр колонки. Увеличение длины колонки позволяет увеличить разрешение, но имеет также обратный эффект, связанный с увеличением времени разделения и уменьшением при этом производительности. В 3 также датся ссылка на то, что лучше использовать большие объмы проб, при этом эффективность фракционирования заметно улучшается.
В 3 датся ссылка на работу, в которой обнаружено, что оптимизировать разделение можно путм расположения насадки в виде слов, так чтобы средний размер пор убывал в направлении потока в колонке. Было в значительной мере уменьшено влияние концентрации, и увеличен выход образца. Оптимальный объм фракции прямо зависит от объма и концентрации вводимого образца, разделительной способности и размера колонки.
Показано также, что уменьшение объма фракции меньше влияет на уменьшение полидисперсности, когда Mr фракции уменьшается или увеличивается объм элюирования т.е. низкомолекулярные вещества выходят более чистыми. В 3 также указывается на то, что образцы в гель-фильтрации можно вводить один за другим с интервалом, соответствующему примерно объму V0 , увеличивая выход образца, экономя растворитель и уменьшая время разделения Клещевой весенне-летний энцефалит.