Влияние химических факторов на микобактерии

Влияние химических факторов на микобактерии.

Микобактерии туберкулеза весьма устойчивы ко многим химическим веществам. Их высокая устойчивость связана со строением клеточной стенки, которая обеспечивает им механическую осмотическую защиту Ерохин, 1982 . В отношение кислот микобактерии довольно резистентны. Так, в 5-10 -ном растворе соляной и серной кислот они становятся жизнеспособными в течение 24ч. В 5 -ном растворе фенола они не погибают в течение 24 ч. Благодарный, 1980 . Высокой бактерицидностью в отношении микобактерий 1 -ный раствор хлорамина с добавлением 1 -ного раствора хлористого аммония Вашков, 1977 . 0,5 -ный раствор этостерила убивает микобактерии туберкулеза в течение 30 мин 5 -ный раствор карболовой кислоты - в течение 5 ч. и 3 -ный раствор лизола - в течение 1ч. Однако, по другим данным, даже 10 -ный раствор лизола убивает микобактерии туберкулеза только в течение 12ч. Благодарный, 1980 . M.avium сохраняет вирулентность в патологическом материале, хранящемся в 30 -ном растворе глицерина при температуре 5 С в течение 2 месяцев, а выживаемость в течение 3 месяцев.

Довольно быстро микобактерии убивают 50-70 алкоголь Lindner, 1971 . Соление и кипячение лишь незначительно обезвреживает микобактерии. Возбудители туберкулеза довольно чувствительны к действию кратковолнового УФ излучения, и при облучении их в течение 30с. Погибало 92,3 микобактерий Шахбанов с соавт 1972 . Возбудитель бычьего вида погибал при инфракрасном электронагреве при температуре 75 С в течение 60с человеческого и птичьего видов при 77 С - 3с. M.intracellulare при 75 С - 30с. Однако значительно устойчивее к инфракрасному излучению и электронагреву M.scrofulaceum, которая погибла при температуре 75 С только через 5мин. Позднякова, 1985 . Устойчивость микобактерий к химическим и физическим факторам обусловлена как их видовой принадлежностью, так и условиями в которых они находятся.

Атипичные микобактерии пор сравнению с M.bovis и M.avium более устойчивы к 3 -ному щелочному раствору формальдегида и 8 -ной эмульсии феносмолина, особенно M.intracellulare и M.gordonae Колычев, 1984 . 10. Иммунизирующие свойства микобактерий.

Со времени открытия возбудителя туберкулеза были проведены многочисленные исследования по изучению иммуногенности живых и убитых туберкулезных и атипичных микобактерий.

Иммунопрофилактика туберкулеза с помощью вакцин гетерогенного типа, изготавливаемых из микобактерий, патогенных для холоднокровных, оказалась неэффективной. Иммунизация животных микобактериями туберкулеза, убитыми физичес - кими или химическими методами тепло, солнечный свет, хлор, йод, олеиновая кислота, мочевина, ацетоном, бензином и др не дала удовлетворительных результатов Кальметт, 1929 . При использовании в качестве вакцин возбудителя туберкулеза птичьего, человеческого, мышиного видов микобактерий, выделенных из медяницы, водяной черепахи, а также эмульсии, приготовленной из лимфатических узлов туберкулезных животных, были установлены их иммуногенные свойства. Вакцина БЦЖ способствует образованию иммунитета у телят, но не обеспечивает надежной защиты от туберкулеза.

Кроме того, появление аллергии у вакцинированных животных и отсутствие пригодных для практики методов дифференциации поствакцинальных реакций на туберкулин от постинфекционных затрудняет ее применение.

Как метод борьбы с туберкулезом иммунизацию КРС в ветеринарной практике не проводят Шишков с соавт 1986 . Некоторые отечественные исследователи рекомендуют использовать вакцину БЦЖ в общем комплексе противотуберкулезных мероприятий.

Изучение вакцинного штамма микобактерий человеческого вида В-115 показало его высокую остаточную вирулентность. Из штамма Валле микобактерий туберкулеза бычьего вида получен новый авирулентный вакцинный штамм БК - Харьков Черкасс, Кандыба, Дикий, 1974 . Изученные иммунизирующие свойства вакцины из штамма БЦЖ, жидкой вакцины БК - Харьков, жидкой вакцины из штамма В-115 Вейсфлейер, 1975 и из штамма К Говоров, Кассич с соавт. ,1978 на КРС в экспериментальных и производных условиях.

Прививка телят не дала образования иммунитета достаточной напряженности. При контакте с больными коровами телята заболевали туберкулезом. 11. Диагностика. Для успешной борьбы с туберкулезом важное значение имеет своевременное выявление больных и зараженных животных. Диагноз на туберкулез у животных устанавливают на основание патологоанатомических, бактериологических, включая биологическую пробу, и аллергическ5их исследований с учетом эпизоотологических данных и клинических признаков болезни.

В качестве дополнительных способов при диагностике туберкулеза у животных применяют серологические исследования и симультанную аллергическую пробу. При проведении бактериологического исследования используют бактериоскопический, культуральный и биологический методы. Для исследования необходимы кусочки печени, селезенки, легких и лимфоузлы от убитых или павших животных.

При наличии туберкулезных изменений в органах берут пробы из пораженных участков. При пересылке взятый материал консервируют в 30 -ном растворе глицерина. От живых животных исследуют молоко, мокроту, слизь, гной и фекалии. Для бактериоскопии из материала делают мазки, фиксируют их на пламени, окрашивают по Циль-Нильсену и исследуют под микроскопом. Микобактерии обнаруживаются не в каждом случае, поэтому просматривают100-200 или даже 500 полей зрения.

Иногда в материале, присланном в лабораторию, туберкулезных микобактерий мало и обнаружить их трудно. Тогда прибегают к методам обогащения центрифугированию либо флотации. Для этого материал измельчают, растирают в ступке, заливают 1 -ным раствором едкого натра, размешивают и переносят в колбу, которую встряхивают 10-15 мин. Затем содержимое центрифугируют 10 мин надосадочную жидкость сливают и, осадок нейтрализуют кислотой и из него делают мазки.

Метод флотации основан на адсорбции углеводородами ксилолом, бензином, лигроином микобактерий туберкулеза и всплывании последних вместе с ними. Его используют чаще всего при исследовании молока и мокроты, бронхиальной слизи, экссудата. Пи исследовании молока 30 мл его наливают в стерильные флаконы с узким горлом емкостью 100 мл и добавляют равное количество 5 -ного раствора едкого натра. Смесь встряхивают в течение 2-3 мин а затем флаконы ставят в водяную баню при температуре 50-60 С на 1час. Затем к содержимому флакона добавляют 1 мл ксилола, и снова встряхивают в течение 15 мин. в шуттель-аппарате.

После встряхивания во флакон добавляют дистиллированную воду, пока его содержимое не поднимется до узкой части горлышка. После отстаивания в течение 1-2 ч. в нем образуется сливкообразное кольцо. 3-4 капли из него наносят пастеровской пипеткой на слегка подогретое предметное стекло. По мере подсыхания наносят на предметное стекло по 3-4 капли еще 2-3 раза, чтобы получить толстый мазок.

Мазки высушивают в сушильном шкафу, обезжиривают эфиром, фиксируют на пламени, окрашивают по Циль-Нильсену и микроскопируют. Для получения культур микобактерий материал перед посевом подвергают обработке по методу Гона, Левенштейна-Сумиоши или Аликаевой. При обработке, по Гону, кусочки органов и тканей измельчают и растирают в ступке, затем заливают 3-10 -ным раствором серной кислоты и центрифугируют 10-15 мин. при 3 тыс.оборотов в минуту. Период воздействия кислотой не должен превышать 20-30 мин. Затем надосадочную жидкость сливают, в осадок добавляют несколько капель стерильного физраствора и делают посевы на питательные среды, а также готовят мазки. Применяя метод Левенштейна-Сумиоши, матеал обрабатывают таким же образом, но перед посевом осадок отмывают от серной кислоты 1-2 раза физиологическим раствором с помощью центрифуги.

По методу А.П. Аликаевой материал разрезают на кусочки, помещают в ступку и заливают 3-6 -ным раствором серной кислоты на 10-20 мин. Затем кусочки тканей промывают 5 мин. физраствором и растирают.

Для получения культур микобактерий делают посевы на питательные среды Петраньяни, Гельберга и др Каждый материал высевают на 5-10 пробирок о средой. Пробирки заливают расплавленным парафином. Посевы просматривают не реже одного раза в неделю и выдерживают в термостате не менее трех месяцев. В случае отсутствия роста с поверхности среды делают соскоб платиновой петлей, готовят мазок для бактериоскопии и в случае обнаружения в нем микобактерий делают посев на свежую среду.

Для биологического исследования используют тот же материал, который был приготовлен для посева, а наличие в нем серной кислоты нейтрализуют 10 -ным раствором двууглекислой соды. Заражают кроликов, трех морских свинок, а при необходимости трех кур и ведут за ними наблюдение. 12.