Наиболее общими тестами, отражающими состояние сосудистотромбоцитарного гемостаза, являются определение длительности кровотечения по Дуке и ретракция кровяного сгустка.
Уколочная проба Дуке. При уколе кончика пальца или мочки уха иглой на глубину 3—4 мм выступающую самостоятельно из ранки кровь снимают фильтровальной бумагой каждые 30 с. Продолжительность кровотечения в норме не превышает 4 мин, при тромбоцитопениях удлиняется до 20 – 30 мин и больше.
Определение ретракции кровяного сгустка (метод Макферлейна). В градуированную центрифужную пробирку помещают 5 мл венозной крови. В нее погружают стеклянную палочку с шероховатой поверхностью, укрепленную вертикально при помощи пробки, закрывающей пробирку. Пробирку устанавливают в водяную баню при 37°С. Через час, после свертывания, стеклянную палочку удаляют вместе со сгустком. Определяют объем оставшейся сыворотки и выражают его в процентах. У здорового человека ретракция кровяного сгустка составляет 44-46%, индекс ретракции (отношение объема отделившейся сыворотки к общему объему крови) – 0,3-0,5. Ретракция кровяного сгустка недостаточна или отсутствует при тромбоцитопениях и тромбоцитопатиях.
Из проб на резистентность капилляров при тромбоцитопениях и тромбоцитопатиях пользуются чаще «симптомом щипка» (на месте щипка через несколько минут появляется кровоизлияние, которое увеличивается неадекватно нанесенной травме капилляров) или «симптомом жгута» (симптом считается положительным, если при наложении на плечо жгута или манжетки тонометра на 3 мин при давлении 50 мм рт. ст. возникают петехии в количестве не менее одной на 1 см2).
В последние годы при диагностике тромбоцитопатий (качественных изменений тромбоцитов) стали применять методы, позволяющие изучить адгезию, агрегацию, реакцию освобождения тромбоцитов.
Из способов изучения адгезии тромбоцитов наиболее информативными являются закрытые методы, при которых кровь прямо из вены пропускается через колонку со стеклянными бусами (диаметр 0,5 мм) с соблюдением времени контакта. По разнице количества тромбоцитов в крови до и после прохождения через колонку судят о количестве тромбоцитов, подвергшихся адгезии к стеклу.
Агрегацию тромбоцитов исследуют в обогащенной тромбоцитами плазме крови с помощью ФЭКа или специальных фотометров (агрегометров), либо микроскопически – путем подсчета тромбоцитарных агрегатов и свободно лежащих тромбоцитов.
Агрегационную функцию тромбоцитов определяют при воздействии различных физиологических агрегирующих агентов: оптимальных и малых доз АДФ, коллагена (в эмульсии), адреналина, малых доз тромбина. При использовании малых доз АДФ и адреналина выявляется вторая волна агрегации, обусловленная «реакцией освобождения» из тромбоцитов собственных агрегирующих агентов (АДФ, адреналина, тромбоксана и др.). Отсутствие второй волны агрегации – важный признак некоторых тромбоцитопатий. Дополнительное представление о реакции освобождения дает изучение тромбоцитарных факторов – 4 пластиночного фактора, серотонина и др. в плазме крови. Исследование тромбоцитарных компонентов после разрушения тромбоцитов (ультразвуком или повторными замораживанием и оттаиванием) способствует разграничению нарушений реакции освобождения от недостаточности пула накопления в клетках этих компонентов. Исследование агрегации тромбоцитов под влиянием ряда нефизиологических агентов, например ристоцетина и бычьего фибриногена, используют в основном при диагностике болезни Виллебранда и синдрома Бернара – Сулье.