Содержащийся в эритроцитах гемоглобин постепенно под воздействием факторов внешней среды изменяется. Эти изменения называют «старением». Со временем гемоглобин в несколько этапов превращается из оксигемоглобина в гематопорфирин. Каждая из форм гемоглобина имеет собственные спектральные характеристики. Спектрофотометрическим методом устанавливается этап превращения гемоглобина. На основе результатов применения данного метода можно судить о давности образования крови в пятне на вещественных доказательствах. Однако на процесс «старения» гемоглобина оказывает влияние в каждом конкретном случае какой-то индивидуальный комплекс факторов. Среди них можно указать влажность, солнечный свет, температуру, свойства материала предмета, на котором располагается след крови, а также исходное состояние крови и т. д. Данные обстоятельства делают результат определения давности образования пятен крови весьма приблизительным.
Вместе с тем в настоящее время, используя биохимические методы, возможно путем определения ферментативной активности крови ответить на вопрос о давности следов крови. Некоторые ферменты крови сохраняют свою активность в течение 80– 100 дней.