Достоверное (доказательное) определение присутствия крови основано на обнаружении форменных элементов (клеток) и красящего вещества крови – гемоглобина и его производных в представленных образцах. Наиболее распространенными методами исследования являются морфологический метод. Вспомогательными методами – тонкослойная хроматография, микролюминесценции, спектральный и микроспектральный анализы. В основе их лежит способность гемоглобина и его производных поглощать волны света определенной длины.
Для каждого производного гемоглобина характер этих спектров специфичен по количеству, расположению, ширине и интенсивности полос поглощения. Для установления наличия крови практически пользуются спектрами производных гемоглобина – гемохромогена и гематопорфирина, полученными после обработки части следа соответствующими реактивами. Для такого исследования достаточно ничтожно малое количество объекта, реакция очень чувствительна, а ее результаты определяются с помощью спектральных насадок СПО-1, АУ-16, спектроскопа прямого видения и микроскопа. Микроспектральное исследование позволяет установить наличие крови даже после попыток ее удаления (стирки) в следах большой давности. Обнаружение спектра гемохромогена или гематопорфирина удостоверяет присутствие крови.
Метод тонкослойной хроматографии является основным и позволяет получить положительный результат даже в сложных случаях. Данный метод основан на том, что растворитель при прохождении через вытяжки, нанесенные на силуфолевые пластины, приводит к разложению крови на компоненты, после чего последние подвергают обработке спиртовым раствором бензидина и 3 %-ным раствором перекиси водорода.
Метод микролюминесценции основан на том, что производные гемоглобина, в частности гематопорфирин, обладают яркой флюоресценцией в УФЛ. Метод информативен при исследовании старых и замытых следов крови.