У чистий сухий бутирометр відміряють автоматичною піпеткою 10 см3 сірчаної кислоти (густиною 1,81–1,82 г/см3) і обережно, щоб не змішувалися рідини, додають піпеткою 10,77 см3 молока. Для цього кінчик піпетки прикладають під кутом до стінки шийки бутирометра (не рекомендується видувати молоко з піпетки). Потім у бутирометр додають 1 см3 ізоамілового спирту.
Змішування міцної сірчаної кислоти з молоком супроводжується сильним нагріванням рідини, тому бутирометр перед заповненням укріплюють у штативі. Якщо під час заповнення шийка бутирометра змочилося сірчаною кислотою, для нейтралізації кислоти пробку покривають крейдою, і лише після цього закорковують бутирометр. Бутирометр струшують до повного розчинення білкових речовин і поміщають у водяну баню пробкою донизу на 5 хв за температури (65 ± 2)° С (за такоъ температури молочний жир перебуває у розплавленому стані).
Після нагрівання бутирометри виймають із водяної бані та вставляють у патрон центрифуги вузькою частиною до центру. У центрифузі їх поміщають симетрично, один навпроти одного; за умови непарної кількості бутирометрів додають бутирометр, заповнений водою. Центрифугування проводять 5 хв за частоти обертання 1000 хв-1. Після центрифугування бутирометри поміщають на 5 хв у водяну баню температурою 65° С.