Дослід 1. Колориметричний мікрометод визначення калію в сироватці крові (метод Лазарева Н.)
Принцип методу.Іони калію в присутності іонівPb2+, Cu2+ і NО-2 утворюють нерозчинний у воді осад К2Pb[Cu(NО2)6] – купрогексанітрит калію-плюмбуму, який розчиняють в суміші риванолу і льодяної ацетатної кислоти. Визначають оптичну густину утвореного розчину, яка прямопропорційна кількості іонів NО-2 . Для визначення рівня калію використовують постійний коефіцієнт, розрахований, виходячи із співідношення NО-2 і К+ в сполуці, що утворилась.
Матеріальне забезпечення:1) 5 % розчин ацетату натрію СН3СООNа · 3 Н2О; 2) Суміш розчину Сu(СН3СОО)2 · Н2О і Рb(СН3СОО)2 · 3 Н2О. Зважують в колбу 7,5 г ацетату міді (кристалічного) і 2 г ацетату свинцю (кристалічного), додають 150 мл дистильованої води. Суміш нагрівають до 100оС і після охолодження відфільтровують. 3) Нітрит натрію (кристалічний); 4) Суміш нітриту натрію і розчинів ацетату міді і ацетату свинцю: до 2 мл суміші розчинів ацетату міді і ацетату свинцю додають 0,25 мг NaNО2. Готують ex tempore. 5) 0,5 % розчин риванолу; 6) Льодяна оцтова кислота; 7) Фотоелектроколориметр; 8) Центрифуга.
Хід роботи:У центрифужну пробірку вносять 0,5 мл розчину ацетату натрію, 0,1 мл досліджуваної сироватки крові і 0,5 мл суміші ацетату міді, ацетату свинцю і нітриту натрію. Вміст пробірки перемішують скляною паличкою і залишають на 1 год, після чого центрифугують протягом 10 хв при 1500 об/хв. Прозору надосадову рідину зливають. У пробірку додають 1 мл розчину ацетату натрію, перемішують скляною паличкою, центрифугують і обережно зливають надосадову рідину. Аналогічно промивання осаду розчином ацетату натрію повторюють ще раз.
Одержаний осад використовують для колориметричних досліджень. До осаду додають 1 мл розчину риванолу і 2 мл льодяної оцтової кислоти. Добре перемішуючи паличкою, розчин за допомогою дистильованої води кількісно переносять в мірну колбу на 25 мл, доводячи до мітки дистильованою водою, перемішують і колориметрують при 540 нм (зелений світлофільтр) в кюветах з товщиною шару 10 мм проти води.
Вміст калію в сироватці крові визначають за формулою:
К = А х 14,04, де
А – показник екстинкції;
14,04 – коефіцієнт перерахунку в ммоль/л.
Пояснити отриманий результат, зробити висновок.
Клініко-діагностичне значення визначення калію.Дослідження мінерального складу крові, сечі та інших біологічних рідин має надзвичайно велике значення в діагностиці порушення водно-електролітного складу, обґрунтування питного режиму, дієти і терапії. Зміни низки елементів у біологічних рідинах часто є специфічними для різних захворювань.
Калій – катіон, основна частина якого знаходиться всередині клітини – до 98%. Незначна частина його міститься в позаклітинному просторі, не відіграє істотної ролі в підтримці осмотичного тиску. Вміст калію в сироватці крові в нормі – 3,8 – 5,2 ммоль/л. При зниженні рівня калію в крові (менше 3 ммоль/л) наступають зміни в роботі серця, порушується ритм і провідність. Гіперкаліємія проявляється нудотою, блювотою, брадикардією, порушенням серцевого ритму. Підвищення концентрації калію плазми вище 6,5 ммоль/л – загрозливе, вище 7,5 до 10,5 ммоль/л – токсичне, а вище 10,5 ммоль/л – смертельне. Причини гіперкаліємії: знижене виділення калію із сечею при нирковій недостатності, внутрішньовенне введення калієвмісних розчинів, некроз клітин, недостатність наднирникових залоз та ін. Гіпокалієміясупроводжується м’язовою гіпотонією, апатією, сухістю шкіри. Спостерігається блювота, тахікардія, зниження артеріального і ріст венозного тиску, аритмії, зниження толерантності до серцевих глікозидів. Причини гіпокаліємії: втрати калію через шлунково-кишковий тракт (блювання, пронос), при вживанні лікарських засобів (діуретиків, проносних, гіпотензивних засобів), хронічні пієло- і гломерулонефрити та ін.
Дослід 2. Визначення кальцію в сечі (проба Сульковича)
Принцип методу.Метод ґрунтується на утворенні малорозчинних солей кальцію при підвищенному його вмісті.
Матеріальне забезпечення:1) Реактив Сульковича: містить щавлеву кислоту – 2,5 г, щавлевокислий амоній – 2,5 г, льодяну ацетатну кислоту – 5,0 мл. Загальний об’єм доводять дистильованою водою до 150 мл.
Хід роботи: До 5 мл сечі, отриманої зранку натще, додають 2,5 мл реактиву Сульковича. У нормі через 30 сек з’являється молочно-біле помутніння сечі. При підвищеній концентрації кальцію в сечі осад більш виражений, при пониженій концентрації сеча залишається прозорою.
Пояснити отриманий результат, зробити висновок.
Клініко-діагностичне значення.Кальцій майже не бере участі у підтримці осмотичного тиску, тому що його вміст у позаклітинному секторі невеликий і значна частина йону зв’язана з білками. У регуляції обміну кальцію беруть участь паратгормон, похідні вітаміну D3 і кальцитонін. Збільшення чи зменшення вмісту йонів кальцію в плазмі крові може призвести до різних патологічних станів. Лікарські препарати, що містять солі кальцію, у зв’язку з цим знаходять широке застосування в різних галузях медицини. При гіперкальціємії загальний вміст кальцію в сироватці крові складає більше 2,9 ммоль/л, а іонізованого кальцію – більше 1,38 ммоль/л. Гіперкальціємія, що перевищує 3,75 ммоль/л (15 мг%), може викликати раптову зупинку серця. Зростання концентрації іонізованого кальцію веде до патологічних станів, що проявляються поліурією, блювотою, депресивним станом, порушенням серцевого ритму. Гіпокальціємія спостерігається при рівні загального кальцію в сироватці крові менше 2,12 ммоль/л (8,5 мг%) і іонізованого кальцію – менше 1,12 ммоль/л (4,5 мг%). Гіпокальціємія у клінічній практиці спостерігається частіше і протікає важче, ніж гіперкальціємія. «Гостра» гіпокальціємія призводить до розвитку тетанії, «хронічна» кальцієва недостатність може супроводжуватись порушенням функції скелетної і гладкої мускулатури, серцево-судинної системи, порушенням згортання крові, розвитком остеопорозу. Причини гіпокальціємії: недостатність паращитовидних залоз, підвищене виведення кальцію при порушеннях травлення і всмоктування, дефіцит вітаміну D чи резистентність до нього, при рахіті та ін.